Analisadores metabólicos orgânicos: sistemas microfisiológicosMonitoramento em tempo realCamada celular transepitelialresistênciae taxa de acidificação extracelular

Pele-em-um-Chip：Transepitelial elétrico Resistência

An extracelular Acidificação Medições

Tatravés um Automação Ar-líquido Interface

A pele é um órgão importante do corpo humano e desempenha um papel vital na proteção dos órgãos internos do corpo humano.Portanto，Muito trabalho foi feito para criar modelos de epidermis artificiais.RealizarTeste de toxicidade da pele in vitro. Estes modelos de tecido são chamados de reconstrução da epidermis humana.Modelo celular（reconstruído humano epiderme，O RhE(É usadoEmIndústria farmacêutica, cosmética e ambientalmédioAvaliação da exposição da pele a substâncias exógenasmédiode毒性研究Aqui apresentamos um nada.MarcaçãodeO método, ou seja,Usado.inteligente laboratório para em em vitro diagnóstico（IMOLA-IVD）Uma plataforma não invasiva baseada em sensores,VenhadetecçãoSobre a membrana porosaO RhEModelo celularE a cruz das célulasEpidermisCélulascamadaresistência（transepitelial elétrico resistência(TEER). Primeiro, cultive fibroblastos de ratos em uma membrana de policarbonato como um modelo de teste, usando biochips personalizadosDesign fechado，E duplo.MicrocanalEstrutura, paraIrrigação contínua e automática de culturasDetectar a taxa de acidificação extracelular das células L929（extracelular acidificação taxaa orelha)eCamada celular transepitelialresistência（transepitélia eletricidaderesistência(TEER)。Através dessa plataformaMonitoramentoO RhEModelo celularO TEERmais de 48 horas.Os testes TEER e EAR mostram queA plataformaPode ser cultivado de forma estável por muito tempono chip.Pelemodelos celulares, parâmetros metabólicos de monitoramento, eDegradação do tecido。

Palavras-chave：TEER；Orgão-em-um-Chipcom;sparentes modelos；reconstruído humano epiderme；impedância；sem rótulo monitoramento

1. INTRODUÇÃO

Como o maior órgão do corpo humano, a pele representaDentro do corpo humanoe externoAmbienteentreEstruturaBarreiras que conectam órgãos com toxinas、Isolamento do patógeno.eProteçãoÓrgãos internosProteção contra os raios ultravioletas（UV）Radiação. Além das importantes barreirasSim, a pele humana.TambémExecuta várias funções básicas do corpo humano, como regulação térmica, sensação e excreção. Porque a pele é humana.Proteção contra os efeitos do ambiente externoA primeira proteção, a nova químicaEstudo de substânciasAs drogas e as toxinas devemAnálise e AvaliaçãoÉ verdade.Capacidade de regular a integridade da pele. Sob a influência destes compostos, a biologia celular utiliza modelos de cultura celular para obter uma compreensão mais aprofundada do comportamento celular regulado por substâncias químicas. No passado.Em dez anos,CientistaDesenvolvimentoÉ.Vários modelos de bioengenhariaUtilizado para estudos de toxicidade da pele. Primeiro modelo de pele baseado em 2D tradicional（2D）Modelo de co-cultura, células córnasVacinação paraCultivoBomnas células fibrosas. Como a cultura em plástico rígido não pode manter as células epiteliais por muito tempo, eParar as células.HierarquizaçãoA engenharia organizacional desenvolveu 3DModelo de pele para reproduzir semelhança no corpoEstrutura e projeta um ambiente mais fisiologicamente relevante através da integração da interface gás-líquido.

A pele humana é composta pelas seguintes camadas primárias, que têmfunções：Epidermiscamadacórtex e tecidos subcutâneos.Integrando diferentes camadas de pele em modelos celulares, os modelos de pele atuais podem ser divididos em exfoliantesModelo epidérmico humano de reconstrução de células, células coagulantes eModelo de camada completa de fibroblastos representativos da pele real e da diafragma epidérmicacom tipos de células adicionais.（Como melanócitos, células estaminais, etc.）Modelo de nível completo. Devido à sua estrutura simplificada, re-CriarPele humana（O RhE）O modelo tem alta reprodutividade e, portanto, é amplamente aceito.O RhEModelo celularpela corna humanaVacinação celular emPolicarbonatosemitransparentemembranae integrá-lo no sistema de cultura celular, colocando-o em placas de orifício padrão, comoComercializadoTranswell® sistema（Corning Inc. e Corning，Nova Iorque，EUA）. O dispositivo coloca a cultura na interface gás-líquido e a superfície da pele é exposta ao ar,FormaçãoFisiologiaAmbientesemelhantecondições de cultivo. Atualmente, háAberto.modelos de pele, bem como modelos comerciais, comoEpiderm™（MatTek em vitro laboratórios de ciências da vida, Bratislava, República Eslovaca），EpiSkin™（EpiSkin, Lyon Cedex, França），PeleÉtica™（EpiSkin），EpiCS®（a CellSystemsGmbH，Troisdorf,Alemanha）eLabcyte.（Japan Tissue Engineering Co., Ltd. [J-TEC], Aichi, Japão）. A Associação ALEXANDRA segue uma abordagem sem fins lucrativos para a produção e testeAberto.Modelo de pele 3D fornecidoplano。

2. Antecedentes

2.1.Últimos avanços em ensaios de toxicidade da pele baseados em epidermis humanos reconstruídos

Do ponto de vista regulatório，Para avaliar e prever os efeitos nocivos de compostos tóxicos e medicamentos na pele, os sistemas de modelagem 3D devem passar por uma ampla gama deTeste de compostosVerificaçãoSeAtravés deCentro Europeu de Validação de Métodos Alternativos（ECVAM）Confirmação e Organização de Cooperação e Desenvolvimento Econômicos（OCDE）Guia de teste（TG）Os modelos com tecnologia de teste podemComo ferramenta aceitávelPara usoTeste de toxicidade da pele. Até agora, a OCDEPara usoGuia de teste de corrosão e irritação da peleGuias，Baseado nos TG 431 e 439 da OCDE, respectivamente.

2.2.Plataforma de chip de órgão e microNascidoMedição

Devido à relevância dos modelos atuais em biologiaAcima，Oferece apenas um significado limitadoAssim, no campo da toxicologiaOs testes estão na direção do chip de órgão（Orgão em Chip，OOC）Desenvolvimento do instrumento。O sistema de chip de órgão descreve uma perfusão que contémpequenoDispositivo de Cultura de Células Microfluido de Câmara，Cultivar células vivas em condições fisiológicas。No entanto, a maioria das plataformas OOC ainda depende fortemente da análise de ponto final.Método，Os diferentes momentos que faltamdeTesteMétodos. Além disso, etiquetas químicas, como etiquetas fluorescentes, podemPotencialmente afetar o metabolismo celular, alterando assim os resultados experimentais. Portanto，Leitura em tempo real com tecnologia sem rótulosNúmeroIntegraçãoequipamentos,ParaMedição para análise espacial e temporalsimMuito significativo.。

２. ３. Pele/Reconstrução da superfície humanaEpidermisCamada celularresistência

Devido aos compostos potencialmente perigososAfeta a espessura da pele, medição da espessuraTambém.Parâmetros dos primeiros estudosUm.Medições destrutivas, como biopsias de tecidos, ou medições não destrutivas, como espectrómetros de Raman cojuais e imagens por ultra-som. Entre os métodos tradicionais e úteisAplicações da cultura celularApenas...É medir a barreira de permeabilidade da pele para avaliar o tecido epitelial ou endotelialdeVitalidade e função. Aqui está.cruzEpidermisCamada celularresistência（TEER）Fornece uma técnica não marcada e rápida para estudar a integridade da pele. Valor do TEERRepresentando.umcamadaOu quantas.camadaCélulascamadasresistênciaValores。

２. ４. AtualmentecruzEpidermisCamada celularresistênciaMediçãoAs desvantagens ecruzEpidermisCamada celularresistênciaAutomaçãoMediçãoNecessidades

Exceto os microProcessamentoExistem também alguns sistemas de teste externos comercialmente disponíveis, como o Volt-Ohm.（World Precision Instruments, Sarasota, Flórida, EUA）,Pode estar pronto. Devido à falta de integração com o sistema de cultura celular, os pesquisadoresPrecisa de manualSeráCulturas celularesda BiologiaCaixa de cultivoao sistema de medição. Falta de reprodução desse processo.sexualidade e padronização,Nem sequer.Oferecer alto fluxoMediçãodeCapacidade. Embora a próxima geração da sala de eletrodos（ComoEndohmquarto）Pode medir diretamente，masMeio de CulturaE o reagente tem que ser manual.Inscreverpara usoCultivas de longo prazo e estudos farmacêuticosAssim, a extensão da pesquisaimpossível, porque os meios antigos não podemRemoção do sistema de cultura sem perfusão automáticaFresco.Meio de CulturaNo geral, o sistema de medição TEER atual ainda depende fortemente do manualoperaçãoeSistema portátil que afeta a estabilidade da mediçãoExperiênciaA reprodutividade。Organização para a Cooperação e o Desenvolvimento Econômicos（OCDE）Penso,Um programa de teste aceitável，A reprodutividade analítica é um critério fundamental na validação. Assim, o campo TEER, através da integração de monitoramento e coleta automática TEER,O sistema pode estarMeio de CulturaExecutar padrões de programação em situações de mudança frequenteMediçãoTambém.Muito significativo.。

Aqui apresentamos um novo tipo de teste de monitoramento automático e coletaDadosMicrofisiologiaSistema de medição（IMOLA-IVDAlemanhaCellasys）Para usoTEERMedição.Através deumseladoDesenhodeNegóciostransformação，Células epidérmicas cultivadas com membranas de policarbonatoO RhEModelo celularAplicar medições TEER para pesquisaO RhEcultivo e integração em plataformas de fluidos automatizados,podeperfusão precisaMeio de CulturaeAdiçãoAlém disso, somos capazes de monitorar a taxa de acidificação extracelular（taxa de acidificação extracelular，orelha）O objetivo da pesquisa empírica é aprovarAutomação integradaSistema de irrigaçãoeTeste de integraçãoPlataforma, RealizaçãoDinâmica em tempo realMediçãoAo mesmo tempo,GarantiaEstabilidade da medição。Este estudo demonstra uma forma não invasiva de avaliar a integridade da peledeValidação e aplicação de métodos de medição.

3．Materiais e Métodos

3.1.Visão geral do laboratório móvel inteligente de diagnóstico in vitro

IMOLA-IVD é um laboratório em um chipMediçãoSistema para monitorar automaticamente L929 mice fibroblasts eEpiderm™ReconstruçãoPele humanaCélulasModelos de TEER e EAR. As operações básicas do IMOLA-IVD foram descritas em trabalhos anteriores.，Simplificando, cada IMOLA-IVD inclui um módulo de alimentação, analógico e digital, bem como um biochip com um sensor integrado que monitora passivamente o microambiente do modelo celular. Experimentos IMOLA-IVD padrão são feitos através do carregamento de dados de coleta e aplicativos de ligaçãoDALiA 2.0Softwareum computador pessoal automatizado para controlar umuma bomba eLigaçãoSeis sistemas IMOLA-IVDMicrofluxoCaminhoA bomba circula entre os estados ON e OFF. EmDesligadoO ciclo de desligamento da bomba permite que as células metabolizem os nutrientes no meio de cultura；EmON (ligado)bombaAbrirCiclo，Rico em nutrientesO meio de cultura é irrigadoPara as células.médio。

3.2MelhoradoBiochip- DQuarto pequeno

BiochipsMódulosContém um chip de sensor conectado à placa de circuito e conectado a umuma pequena câmara cilíndrica,Usado paraProteja a conexão do chip eConectar as células emeios de cultivo. umCabeça de fluidoDiretaConectar câmara seladaFormar um selo líquido.、Microvolume estático（~ 6μL）sala de reação,EmIntegraçãodeSuperfície do sensorMediçãoTaxa de acidificação extracelular（orelha）eCooperação de oxigênio （Figura 1a）No entanto, a medição é necessária.O RhENo caso,Cultura em membrana porosaCélulasSensores de eletrodos IMOLA-IVD não adequados para biochips padrão ou padrão（IDES）Mediçãoresistênciapara superar essas restrições, o novoSala fechadaE cabeça de fluido projetado para manter ar-líquido usando o Pro/Engineer Wildfire 4.0 （PTC Inc., Needham, MA, EUA）。seladoUsarUltimaker 2 （UltimakerBV.Geldermalsen，Países Baixos）Usando ácido láctico（PLA）E borracha de siliconeadesivos médicos（Corning Inc., Nova Iorque, EUA）Conecte-se ao biochipBiochip. RedesignadoBiochipQuarto pequeno é aplicávelAmpliação da sala de cultivoE outrosCultura em membrana porosaCélulas（Figura 1b）deO RhE。

3.3.Células L929ReconstruçãoPele humanaCélulasPreparação e cultivo

Registro de ratos em fibrócitos（L929）eReconstruçãoPele humanaCélulas (O RhEde)cruzCélulas epiteliaiscamadaresistênciaValor. Células L929 em mais 10%Soro de vaca fetal（FBS） e10 μg/ ml gentamicina（THermão Fisher, Waltham (em inglês)MA, Estados Unidos da América）Células.conformepadrãodeEspecificações de laboratório（GLP）cultivo e conservação em 37℃E depois de 5% de cultivo em uma caixa de cultivo, em 95%IntegraçãoQuando as células são transmitidas, 100.000 célulasespécieem 12mmTranswell® Acima，Diâmetro do orifício3μdo M.Membrana porosa（Corning Emc.）。transbemPosteriormente foi colocado em 6buracoSobre a placa，Incubar em 1 ml de DMEM por mais 24 horas e transferir paramodificadoBiochipNo meio. As células L929 são linhas celulares padrão em nosso laboratório para validaçãoExperiência。

SeráEpiDerm™O RhEModelo celularTransferir para a placa de 6 buracos e em 5,5 mm/5em mLMatTek sem soro médio de longa duração（#EPI-100-NMM-250） （Laboratórios de ciências da vida MatTek in vitro）trocar o meio a cada 48 horas até a transferência paraBiochipsmédioTEERExperiência. 24 h antes do início do experimento, reduza o meio para 0,9 mL e coloque em 12Placa de buracoRi.Modificado Biochip- DDepois de 20 min de esterilização a temperatura ambiente em etanol a 70%, enxague com água desionizada estéril. BiochipsIrrigaçãoO DMEM sem tampão é tratado por 24 h para estabilizar a temperatura e, em seguida, a cultura de membrana é colocada no chip.

3.4.AutomaçãoIntrodução ao sistema de irrigação

Foi projetado um automóvelIrrigaçãosistema.AutomaçãoMonitoramentoCultivo em biochip por 48 horasacimadeO RhEModelo celularO TEER. O sistema é composto por dois módulos de fluido（FM）composição,Através deeTygon® E-3603（O ProLiquidGmbH,de UeberlingenAlemanha）TubosLigaçãoemindependênciadeTubosEstas redes independentes passamIMOLA-IVD 泵padrãoconfiguraçãopara ON/OFFInterruptorprocedimentos,Fornecer um meio de cultura celular rico em nutrientes para as células basais，e regularmente paraTranswell® membranadeToporegião,Bombeamento de sal tampão de fosfatoSolução（PBS）Como mostrado na Figura 2.Fluxo de mídiaMódulos em DMEM sem buffere 0,2% do SDSMeio de CulturaAlternar entre，Disponível paraFundo da membranaCélulas. O módulo de medição TEER conectado ao PBS para medição TEER ou teste pode ser usado para vacinaçãoO RhEda superfície.Substâncias de teste solúveis em água。

Células L929Educação emNa pequena câmara porosa,O RhEModelo de cultura celular em modificado Biochip- Sobre D，Através deDMEM sem bufferIrrigaçãobombaRealizar36 horasCiclodeCultivoPara o L929células, para monitorar a acidificação celular,bombaON (ligado)tempoPor 5 minutos, enquanto a bomba desligadatempo5 minutos, 10 minutos, 30 minutos e 55 minutos. ParaO RhEModelo celularA bomba.Ciclo5 minutos ON, 10 minutos OFF, 5 minutos ON, 25 minutos OFF, 5 minutos ON, 10 minutos OFF. Em 25Bomba de minutosFase OFF, bombeando PBS para a membranaSala superior, no chipresistênciaConstrução de circuitos entre o sensor e o eletrodo de fio da cabeça do fluidoConecte-se e registre as medições TEER. 750 μL a uma velocidade de 60 μL/minda PBS.Bombear para a membrana no chip e, em seguida, remover a uma velocidade de 120 μL / min. A medição TEER foi realizada durante 25 minutos de desligamento da bomba. Após um ciclo de medição estável previsto（Células L929 eO RhEModelo celular47 e 36 horas, respectivamente.）O DMEM sem tampão de 0,2% SDS foi bombeado no chip como controle positivo. Perfusão com o meio SDS por pelo menos 12 horas para confirmar o efeito do grupo de controle sobre o TEER medido.

4. Resultados e Discussão

4.1.Epitelial menstrual redesenhadoresistênciaseladofunção

SeráPorosoA membrana é inserida na câmara de cultivo para determinar o volume da câmara de cultivo de ~ 170 μL.Modelo de correspondênciaPerfusão na cavidade através de orifícios de entrada formados sob a membrana，Os orifícios no fundo da membrana permitem que nutrientes frescos se espalhem passivamente para a base da célula e os resíduos da célulaDifusão das células. Durante o ciclo de bomba ON,Após o consumo de nutrientesBombeamento de mídia para fora da câmara（Figura 2）。O RhEA superfície superior da cultura é exposta ao ar ambiente e, após um longo período de cultura, o estímulo se diferencia em umdo Ali.estratificação. Para medir o TEER dessas culturas, a cabeça de fluido redesenhada contém um bidirecionaldeVálvula de entrada / saída para distribuir periodicamente uma certa quantidade de solução de PBS. Isto.MétodoConectar a membrana porosaElétrodo de condução da cavidade superior（Veja Figura 1b）O circuito entre o eletrodo IDES plano e o chip do sensor. Válvula de derramamento deixa o eletrodo TEER afogado em estávelMeio de CulturaEm volume, para evitar o derramamento. ContínuoCinco minutos.Registrar TEER da membrana e, em seguida, medirDepois...Remover PBS para manter ALI。

4.2.Fibrocitos de ratosdeDeterminação da taxa de acidificação extracelular

Usar medições automáticasMedição em tempo real do programaEAR， O L929As células crescem emFilme de policarbonato. 50 com DMEM sem bufferμA taxa de L / min para perfusão de células L929. A Figura 3 mostra quebombapH medido em fases alternadas（em mV em unidades）A barra vermelha indica a bombaDesligadoFase, irrigação de meios de cultura frescosCélulas.AtivoSubstâncias nutritivasgeraçãoObrigadoPara resíduos ácidos, os sensores de óxido metálico no biochip detectam isso.MetabólitosA barra verde indica a bombaON (ligado)Fase. EmEsteFasemédioA membrana.Baixoinfusão de meios frescos,fornecer nutrição paraCélulas cultivadas na membranaComo pode ser visto no gráfico, quandoMeio de CulturaAo acidificar, desligue a bomba.Fase55Em minutos.A tensão aumentará de ~ 5 mV e o tempo será menor.DentroNão haverá mudanças significativas na tensão.

4.3.Respostas metabólicas de fibroblastos de ratos ao meio de cultura de docealquilo*

Uma vez que a bombaON (ligado)No final do ciclo, a tensão medida cai rapidamente até atingir a linha de base（Estabilidade）Valor. Há um curto período antes da queda.Atraso, isso pode ser devido a meios frescos com chips já disponíveisacidificaçãoMeio de Culturamistura entrecausandode，Porque as exportações estão acima das importações. Em 58 horas, o sinal medido caiu. Isso pode ser devido à ruptura da membrana celular e à liberação do conteúdo intracelular para o meio de cultura. Em 56 horas, as células foram dissolvidas e, portanto, não produzir resíduos acidificação ao redor do meio, levando à bomba em 55 minutosDesligadoO sinal de fase é plano. Figura 4 descreve a fase OFF durante a duração do experimento de 55 minutosPersistentemedição do ouvido.Podemos ver,InscreverApós a SDS, o EAR aumenta e, em seguida, cai rapidamente abaixo de zero, indicando a fissão celular. Em seguida, gradualmente se aproxima de zero até o fim do experimento.

4.4.Fibrocitos de ratosO TEER（TransepitelialCamada celularresistência）Monitoramento

Além de monitorar a taxa metabólica das células L929, a bomba em 25 minutosOFFPeríodoTambémpodeMonitoramento do valor TEER. Durante a medição TEER, medição com bomba de PBSQuarto pequenocomConectar circuitoPara medição, os valores podem mudar. TEER começaInúmerosValoresPorque...Existem entre os pares de eletrodosDesligado. Incorporado emCabeça de fluidoO eletrodo condutor é mergulhado em PBS, com a membranano chip.Condutores elétricosOs eletrodos juntosFormação de conexãoO circuito. PBS permanece na célula por 5 minutos, bombaDesligadopara uma monitorização estável. Em seguida, o PBS é bombeado para medir.Komuro até o próximo ciclo de medição。

A Figura 4 mostra o EAR e TEER medidos a partir de 25 horas. Na bombaDesligadoNa fase, o EAR é calculado por regressão linear. Tabela 1 resume o SDSInscreverAnterior eInscreverresultados posteriores. Começo do experimento 24Horas depois, o número realresistênciaEstabilizado perto de 190 ohms, Fiction.resistênciapara -40 ohms. Conhecido como L929Fibrocitos de ratos mantidos em culturaÚnico andar, previstoresistênciaEstabilizar em um nível baixo. Exposição a 0,2% SDS médio após 8 horas（tempopara o56 horas），Número realresistênciadiminuição de 14,8%,Adicionamento correspondenteSDScausandomorte das células.Parte fictíciaresistênciadiminuição de 6,11%. Os resultados mostram que o desenvolvimentoseladoProjeto e bombasMódulosCapacidade de automatizaçãoresistênciaMedição。

4.4.O RhEModelo celulardeTEER（TransepitelialCamada celularresistência）Monitoramento

Use o mesmo par de configurações acima重建人表皮Modelo celular (reconstruído humano epiderme，O RhE）Monitoramento contínuo do TEER por cerca de 50 horas. Durante as primeiras 12 horas, o TEER permaneceu relativamente estável, como mostrado na Figura 5. Após 36 horas e 2 horas após o tratamento das células com 0,2% SDS, o TEER médioO valor caiu repentinamente.b)Mídio de Cultura SDSInscreverAntes, o valor TEER foi inicialmenteAumento de linha retaUsando a PBS.InscreverApós a cavidade superior, estabilize rapidamente e mantenha até o fim do ciclo de medição de 5 minutos. Quando deSala superiormédioRemover o meioDepoisPorqueCurto-circuito， Teer novamenteTransformar-se em inúmeros valores。

EmtrocarDepois de 2 horas para o meio SDS, as mudanças na curva TEER podem ser detectadas. Inicialmente, o valor TEERInscreverO mesmo antes do meio de cultivo SDSMas...O valor TEER diminui constantemente durante a medição até se estabilizar em um valor mais baixo. Isso resulta em uma redução do TEER médio medido, queInscreverFisição celular causada pela SDSCoincidênciaAlém disso, com o SDSAdição de mídiaaumento do tempo,resistênciaO pico inicial diminuiu. Apesar da exposição ao SDS, a persistência do pico inicial parece indicar a sobrevivência das células. Vale ressaltar que o antigo IMOLA-IVDO estudo foi realizado em células simples de camada única.Concentrações relativamente baixas de 0,2% SDSPode ser.Matar as células em menos tempoE.MaisGraveCélulasfissuraprocessoRelativamente lento.Pode ser atribuído a células cultivadas em modelos de pele 3D mais complexosVidaAumento da força。

5. Conclusões

Aqui, apresentamos uma abordagem inovadora para o monitoramento não invasivo de culturas celulares em membranas porosas bidimensionais e tridimensionais em várias formas. Nossos BiochipsDesign de vedação comprovadoApoia a monocamada de fibrócitos de ratos, bem como mais complexos重建人表皮Modelo celular (reconstruído humano epiderme，O RhE）Além disso, um sistema de fluidos automatizados de duas partes foi projetado para processar o transporte da solução PBS eInscreverParaTopoAs câmaras realizam medições TEER. Usando células L929, foi projetada uma operação padrãoMétodoAtravés de regularmenteMediçãoTEER para monitorar a taxa metabólica e a integridade da barreira. Mídio de Cultura SDSInscreverMantido antes.Vitalidade celular，Como um controle positivo。

Após o teste inicial com células L929,重建人表皮Modelo celularO TEER é monitorado. TEERValor de exibição modelo de pele pode ser cultivadopelo menos 24 horas,InscreverMídio de Cultura SDSA separação celular posterior tambémVai.Atraso. Pode ser usado em experimentos posteriores.SDSConcentração para melhorar o tempo de resposta do controle. No geral, este trabalho é uma prova de conceito.Experiênciademonstrando a capacidade do IMOLA-IVD para modelos complexos de tecidos 3D, comoNão invasivoFerramentas para automatizar a análise celular.