Sintetizador de péptidosA calibração é um elemento central para garantir a pureza, a produtividade e a repetibilidade dos experimentos dos produtos sintéticos, e é necessária uma calibração sistemática para os módulos-chave como a precisão da entrada de fluido, o controle de temperatura, a estabilidade da pressão e o sistema de teste. Abaixo estão os processos de calibração passo a passo, em conformidade com as especificações da indústria, para sintetizadores de polipéptidos de fase sólida convencionais.

Preparação pré-calibração: pré-tratamento do ambiente e do equipamento

Confirmação das condições ambientais: estabilizar a temperatura do laboratório em 20-25 ° C (flutuação ≤ ± 1 ° C), o controle da umidade relativa em 40% -60%, evitando o fluxo de ar do equipamento de sopro direto. Inicie o pré-aquecimento do equipamento 1 hora antes da calibração para garantir que os módulos estejam em um estado estável de funcionamento.

Preparação de ferramentas e substâncias padrão: Preparação de equipamentos padrão com certificação metrológica (por exemplo, balanças eletrônicas de 0,01 mg, termômetros padrão, pressômetros de precisão, tubos padrão de 100 μL) e reagentes de calibração como metanol hídrico (cromatográfica pura) e soluções padrão de tritona (0,1 mol / L).

Limpeza e inspeção do equipamento: desmontar a tubulação de entrada de líquido, coluna de reação, lavar com metanol sem água 3 vezes após secar; Verifique a pressão do cilindro de aço de nitrogênio (≥0.5MPa), substitua a almofada de vedação envelhecida para garantir que a tubulação não tenha vazamentos.

Calibração do módulo principal: parâmetros-chave de controle preciso

Calibração do sistema de entrada de líquido: garantir a precisão da dosagem do reagente

Calibração do fluxo da bomba de entrada: selecione o volume de entrada comum (10 μL, 50 μL, 100 μL), defina a taxa de entrada de 10 μL / s, insera a extremidade do tubo de entrada em um tubo centrífugo limpo pré-pesado e inicie o processo de entrada de líquido. Cada gradiente de volume é repetido 3 vezes, pesando a massa de metanol sem água coletada com uma balança eletrônica, de acordo com a densidade de metanol (0,7918g / mL a 20 ° C) para calcular o volume real de entrada de líquido, o erro deve ser ≤ ± 2%, caso contrário, ajustar a pressão do corpo da bomba ou substituir o anel de vedação.

Calibração de precisão da distribuição de reagentes: conectar os diferentes tubos de reagentes à interface de pipeta padrão, definir um volume de distribuição único de 50 μL, distribuir repetidamente 10 vezes para a garrafa de capacidade, verificar o erro de volume total com o método de capacidade para garantir ≤ ± 1%; Verificar simultaneamente a diferença de tempo durante a distribuição sincronizada de múltiplos tubos leva ≤ 0,5 segundos.

Calibração do sistema de temperatura e pressão: ambiente de reação estável

Calibração de temperatura de reação: inserir o termômetro padrão no interior da coluna de reação (perto da área de resina), definir 25 ℃, 30 ℃, 40 ℃ três pontos de temperatura comuns, isolamento após 30 minutos para ler o valor de temperatura, cada ponto é repetido 3 vezes, o erro deve ≤ ± 0,5 ℃. Se exceder o limite, corrija ou substitua o elemento de aquecimento através dos parâmetros do módulo de controle de temperatura do dispositivo.

Calibração da pressão de nitrogênio: fechar a saída da coluna de reação, conectar o pressômetro de precisão à entrada de nitrogênio, definir a pressão de 0,1 MPa, 0,2 MPa, 0,3 MPa, estabilizar a leitura após 5 minutos, o erro é necessário ≤ ± 0,01 MPa. Teste a taxa de varredura de nitrogênio após a calibração para garantir que a resina se volte uniformemente e sem salpicaduras.

Calibração do módulo de inspeção e controle: garantir a precisão do monitoramento do processo

Calibração do sistema de detecção de tritona: a solução padrão de tritona com concentração de 0,01 mmol / L, 0,05 mmol / L e 0,1 mmol / L é preparada para a detecção de amostragem automática do equipamento, registro do valor de absorção e desenho da curva padrão, o coeficiente de correlação deve ser ≥ 0,995. Se a linearidade não for boa, limpe o caminho de detecção ou substitua a fonte de luz.

Calibração de controle do programa: escrever o programa de síntese padrão (incluindo 3 etapas de desprotecção, lavagem e acoplamento), registrar o desvio do tempo de execução real e do tempo definido de cada etapa, cada etapa é repetida 5 vezes, o desvio leva ≤ ± 1 segundo. Verifique a resposta de troca de tubulação durante a mudança de etapas para garantir que não haja contaminação cruzada residual de reagentes.

Verificação e registro pós-calibração: garantir a validade da calibração

Verificação de operação de carga vazia: execute o processo de síntese de carga vazia calibrado, execute 3 ciclos consecutivos, verifique o estado operacional de cada módulo para garantir que não haja vazamento, acústico, deriva de parâmetros e outros problemas.

Validação de síntese de péptidos padrão: escolha o pentépeptido padrão (como Leu-Enkephalin) para a síntese, a pureza do produto por HPLC deve ser ≥95%, e o desvio de dados pós-calibração histórico ≤ ± 2%, para confirmar o efeito de calibração.

Arquivo de registros de calibração: registro detalhado da data de calibração, condições ambientais, pessoal de calibração, números de equipamento padrão, dados de calibração de cada módulo e valores de desvio, colar o identificador de calibração para determinar o próximo ciclo de calibração (recomendado a cada 6 meses ou calibração antecipada após a síntese de 500 vezes).