Um,Sintetizador de polipéptidos totalmente automáticoCalibração e preparação do equipamento

Instalação e depuração

A instalação e depuração do equipamento são realizadas por técnicos profissionais para garantir que o equipamento funcione corretamente.

Verifique se a garrafa de armazenamento de solventes está bem ligada ao tubo de gás e se todas as partes do instrumento estão intactas.

Abra o interruptor de alimentação do sintetizador e o interruptor de ar comprimido para verificar se a pressão está dentro do intervalo (por exemplo, a pressão do medidor "AIR" é maior que 60 psi e menor que 100 psi); A pressão de medição "N2" é maior que 5 psi e menor que 10 psi).

Calibração e testes

Calibrar e testar o equipamento de acordo com as instruções do fabricante para garantir que todos os sistemas (por exemplo, bombas, válvulas, detectores, etc.) funcionem corretamente.

Realizar testes de temperatura, códigos de barras, mistura do reator, agulhas de extração de líquido, garrafas de aminoácidos; Teste de válvulas eletromagnéticas; Calibração do fluxo de garrafas de reagentes químicos e garrafas de aminoácidos; Calibração de controle UV.

Escolha o recipiente de reação adequado

Escolha o recipiente de reação adequado de acordo com a escala da síntese e certifique-se de que o material do recipiente não reaga com o reativo ou o solvente.

Preparação de reagentes e materiais

Preparação do Reagente

Prepare os aminoácidos, reagentes ativantes, solventes, etc. para a síntese, assegurando que todos os materiais estejam frescos e puros para evitar a introdução de impurezas.

De acordo com o esquema de síntese, é pesado de acordo com a proporção de substância necessária para garantir a precisão.

O reagente é carregado em cada frasco de armazenamento rotulado.

Preparação da resina

Adicione a resina ao sintetizador de fase sólida, infle a resina com o solvente apropriado, como DCM, e seque.

Lave a resina com solventes como DMF para remover as impurezas e seque a reposição após a lavagem.

III. Operação de síntese

Definir as condições de reação

Defina as condições de reação adequadas de acordo com a sequência e o comprimento dos péptidos necessários, incluindo temperatura, pressão, tempo, etc.

Desproteção

Remove o grupo protetor do aminoácido anterior para que ele possa reagir com o próximo.

Por exemplo, desproteja com uma solução de 40% de ácido trifluoroacetico/diclorometano e lave com diclorometano, metanol, etc.

acoplamento

Os novos aminoácidos são ligados aos aminoácidos desprotegidos para formar ligações peptídicas.

O primeiro aminoácido (geralmente começando no extremo C) é dissolvido em um determinado volume de DMF e adicionado a um condensador (como DCC, HBTU, etc.) para ser ativado.

Coloque a solução de aminoácidos ativada no sintetizador de fase sólida, suplemente o DMF até a concentração de reação apropriada e agite para a reação de sintetização.

lavagem

Limpe as substâncias não reagidas e os subprodutos para garantir a pureza da reação.

Após a conclusão de cada etapa da síntese, a lavagem é necessária para remover os subprodutos da reação e as matérias-primas não reagidas, reduzindo o acúmulo de impurezas.

Repita os passos

Repita as etapas de desprotecção e acoplamento até a cadeia de péptidos atingir o comprimento predeterminado.

Corte e purificação de produtos

Fixação da resina

Configure o lito (que geralmente contém ácidos fortes como TFA) e guarde no congelador com antecedência.

Adicione a resina peptídica ao reactor, adicione o lito pré-refrigerado e agite a reação para separar o polipéptido da resina.

Após a fissura, o líquido de reação é liberado, filtrado para remover a resina e lavado com solventes como TFA.

Purificação de péptidos

Transferir o lito para um evaporador rotativo para concentrar em pequenos volumes a temperatura ambiente.

O polipéptido é precipitado usando o precipitante apropriado (por exemplo, metil-tert-butil éter) e o péptido bruto é obtido por centrifugação, lavagem e outras etapas.

Os péptidos brutos são purificados usando métodos como cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para remover impurezas e isolar os polipéptidos alvo.

Concentração, filtração e liofilização

A solução polipéptida purificada é evaporada por rotação para remover o solvente orgânico e obter uma solução polipéptida concentrada.

A solução polipéptida concentrada é filtrada estérilmente.

Coloque a solução polipéptida filtrada em um freezer e configure o procedimento de aquecimento apropriado para o freezer.

V. Controle de qualidade e registro

Monitoramento do processo de resposta

Monitore o processo de reação usando métodos de detecção apropriados (por exemplo, detecção ultravioleta, espectroscopia de massa, etc.) para garantir que cada etapa da reação ocorre como esperado.

Registros e relatórios

Registre detalhadamente os parâmetros operacionais e os resultados de cada etapa, incluindo o uso de reagentes, tempo de reação, temperatura, pressão e muito mais.

Gerar relatórios experimentais que resumem informações como dados críticos e pureza do produto durante o processo de síntese.