O fluxo de trabalho do microscópio eletrônico (EM) abrange quatro etapas centrais: preparação de amostras, depuração de equipamentos, imagem e análise de dados, cada uma das quais precisa ser manipulada de forma minuciosa para garantir a qualidade da imagem.
A preparação de amostras é a base da imagem. O eletroscópio de transmissão (TEM) exige que a espessura da amostra seja inferior a 100 nanômetros, e as amostras biológicas sejam enterradas através da fixação de pentadialdehido, desidratação de etanol em gradiente e resina epóxida e cortadas em cortes de nanoescala por meio de uma máquina de corte ultrafina; As amostras de metal precisam ser moídas mecânicamente até o nível de microns e diluídas ainda mais por meio de diluição iónica ou por meio de dupla pulverização eletrólica. As amostras de eletroscópio de varredura (SEM) devem ser mantidas em forma superficial e as amostras biológicas devem ser fixadas, desidratadas, secadas no ponto crítico e tratadas com injeção de ouro para melhorar a condutividade elétrica.
A depuração do equipamento deve ser pré-aquecida durante 30 minutos após a inicialização, até que o instrumento esteja estável. Primeiro, ajuste a arma eletrônica para que o feixe de eletrônicos se concentre na amostra, controlando o diâmetro do fluxo de feixe através do apendice de luz para equilibrar a resolução e o brilho. Em seguida, a lente giratória e o anel de foco dos óculos ajustam a distância focal para garantir que a imagem seja clara; Escolha o multiplicador de ampliação adequado de acordo com as características da amostra para evitar distorções causadas por excessos. Por fim, otimizando a qualidade da imagem ajustando o contraste e o brilho, o suporte móvel coloca a área alvo no centro do campo de visão.
Na fase de imagem de alta definição, o modo de imagem deve ser selecionado de acordo com o tipo de amostra. TEM forma imagens de alta resolução através de amostras de penetração eletrônica que permitem observar a ultra-microestrutura interna da célula; O SEM utiliza sinais eletrônicos secundários para apresentar a morfologia da superfície da amostra e é adequado para analisar as características da superfície do material. Durante o processo de imagem, é necessário monitorar a qualidade da imagem em tempo real e ajustar os parâmetros oportunamente.
A análise de dados utiliza software profissional para ampliar, girar, medir e reconstruir imagens em 3D, extrair parâmetros estruturais e características morfológicas para fornecer base quantitativa para a pesquisa científica.