Calibrador enzimático de comprimento de onda completo PTÉ um instrumento de análise de alta precisão que combina vários modos de detecção como absorção de luz visível, fluorescência e emissão química, amplamente utilizado em ciências da vida, diagnóstico clínico, pesquisa e desenvolvimento de medicamentos e segurança alimentar. Suas principais vantagens são a cobertura de comprimento de onda amplo (normalmente 190-1000 nm) e a capacidade de detecção multifuncional para atender a uma variedade de necessidades, desde a pesquisa científica básica até a produção industrial. Baseado na lei de absorção de luz (Lei de Bill-Lambert), a emissão de comprimento de onda específico de luz através da fonte de luz, após a absorção da amostra, o detector mede a intensidade de luz residual e calcula a absorção (A) para determinar a concentração molecular alvo.
Calibrador enzimático de comprimento de onda completo PTA operação requer a configuração de parâmetros e o controle de processo em combinação com as necessidades experimentais (por exemplo, padrões de detecção, tipos de amostras), com as etapas principais como "Preparação - Configuração - Detecção - Processamento de Dados" e o seguinte processo operacional geral:
Preparação antes da operação
Preparação de amostras e reagentes
Certifique-se de que as amostras a serem testadas (por exemplo, placa ELISA, solução de ácido nucleico, suspensão celular, etc.) foram tratadas de acordo com o programa experimental, e a placa microporosa não tem bolhas, gotas de parede pendurada (se houver bolhas, você pode bater suavemente na parede da placa para remover; gotas de parede pendurada devem secar a borda com toalha de papel).
Prepare o controle em branco, o padrão, o controle de qualidade e o layout padrão em uma placa de microporos (recomenda-se gravar o layout de posição de poros para evitar confusão).
Inspeção de instrumentos e ambiente
Verifique se o cabo de alimentação do calibrador enzimático está conectado corretamente, verifique se a câmara da amostra está limpa (sem poeira, resíduos líquidos) antes de ligar e limpe com um pano sem poeira, se necessário.
Se o experimento requerer controle de temperatura (por exemplo, incubação a 37 ° C) ou oscilação, verifique com antecedência se o instrumento funciona corretamente (por exemplo, se o módulo de controle de temperatura pode atingir a temperatura definida).
Ligue o computador e a fonte de alimentação do calibrador enzimático, inicie o software operacional e aguarde a conclusão da auto-inspeção do instrumento (geralmente o estado "pronto" é exibido).
II. Configuração do método de teste
Selecionar o modo de detecção
Escolha o padrão de detecção correspondente no software de acordo com o tipo de experimento:
Detecção de luz de absorção (por exemplo, ELISA, quantificação de ácido nucleico): é necessário definir o comprimento de onda de detecção (por exemplo, comprimento de onda principal de 450 nm, comprimento de onda de referência de 630 nm), largura de banda (padrão 1-5 nm).
Detecção de fluorescência: é necessário definir o comprimento de onda de excitação (por exemplo, 485nm), o comprimento de onda de emissão (por exemplo, 535nm) e selecionar a leitura superior / inferior (amostras líquidas geralmente são selecionadas no topo, culturas celulares são selecionadas no fundo).
Detecção de luminescência química: não é necessário definir o comprimento de onda, selecione diretamente o modo de "luminescência química", atenção para desligar a fonte de luz da câmara da amostra para reduzir a interferência.
Detecção dinâmica: é necessário definir o intervalo de detecção adicional (por exemplo, uma leitura a cada 10 segundos), a duração total da detecção (por exemplo, 30 minutos) e o controle de temperatura ativado (se a reação termostática for necessária).
Definir parâmetros da placa microporosa
Selecione as especificações da placa de microfuros (por exemplo, placa de 96 furos, placa de 384 furos) e defina a faixa de detecção (por exemplo, "Detecção de placa completa" ou especifique um local de furo específico, por exemplo, A1-H12).
Para excluir efeitos de borda ou perfurações parciais, você pode marcar os perfurações como "não detectados" no software.
Configurações de acessibilidade
Controle de temperatura: se a reação requerer uma temperatura constante (por exemplo, uma reação enzimática a 37 ° C), defina a temperatura alvo (o erro geralmente é de ± 0,1 ° C) e aguarde até o pré-aquecimento do instrumento até a temperatura definida.
Quando a amostra precisa ser misturada antes da detecção, defina o modo de vibração (por exemplo, vibração linear), a velocidade (por exemplo, 500 rpm) e o tempo (por exemplo, 10 segundos).
Correção de comprimento de onda de referência (detecção de absorção de luz): Habilite a "detecção de comprimento de onda duplo" para melhorar a precisão dos dados deduzindo interferências de fundo (como arranhões de placas microporosas, bolhas) com comprimentos de onda de referência (por exemplo, 630 nm).
Teste de amostras
Carregar placas microporosas
Coloque suavemente a placa microporosa na bandeja da sala de amostras para garantir que a borda da placa esteja alinhada com a ranura de posicionamento da bandeja (para evitar que o desvio de posição cause erros de leitura) e feche a porta da sala de amostras.
Iniciar a detecção
Clique em "Iniciar detecção" no software e o instrumento é executado automaticamente de acordo com o método padrão e a tela mostra o progresso da detecção em tempo real (por exemplo, perfurações concluídas, leituras atuais).
Evite tocar o instrumento ou abrir a porta da câmara da amostra durante o processo de inspeção para evitar interferências na estabilidade da via óptica.
Tratamento e exportação de dados
Ver resultados em tempo real
Após a conclusão da inspeção, o software gera automaticamente dados brutos (por exemplo, valores de absorção, intensidade de fluorescência) e os apresenta em forma de tabela ou termográfico.
É possível visualizar dados de um único buraco, médias (por exemplo, médias de buracos duplicados em padrões) ou gerar curvas padrão (se a concentração padrão for definida).
Análise de dados
Processamento de dados de acordo com as necessidades experimentais:
Análise quantitativa (por exemplo, ELISA): o software calcula automaticamente a concentração desconhecida da amostra ao ajustar a curva padrão (linear, quadraparâmetro, etc.) com a concentração padrão e os valores de sinal correspondentes.
Cálculo da proporção (por exemplo, pureza do ácido nucleico): cálculo automático da proporção 260/280nm e 260/230nm na detecção de luz de absorção para avaliar a pureza da amostra.
Curva dinâmica: gerar uma curva "sinal-valor-tempo" para calcular a taxa de resposta, a meia-vida e outros parâmetros.
Exportação e armazenamento de dados
Salve os dados no formato padrão do software (por exemplo, .csv, .txt) ou exporte para o Excel, em formato PDF para a redação de relatórios.
Recomenda-se salvar o modelo do método de detecção ao mesmo tempo (o mesmo experimento pode ser chamado diretamente na próxima vez, sem a necessidade de repetir a configuração).
5. Organização após a operação
Desligue o instrumento
Após a conclusão do teste, retire a placa microporosa e limpe a câmara da amostra (se houver vazamento de líquido, limpe-a oportunamente).
Desligue o software de calibração enzimática, a fonte de alimentação do instrumento e a fonte de alimentação do computador.
Registro e limpeza
Registre informações experimentais (como data de teste, modelo de instrumento, parâmetros do método) para facilitar a rastreabilidade dos dados.
Limpe regularmente a sala de amostras e a bandeja (limpe com 75% de álcool para evitar resíduos de reagentes corrosivos) e cubra a cobertura contra poeira quando não estiver em uso por muito tempo.