Coluna cromatográfica WatersAs precauções de uso são as seguintes:

Instalação e Conexão:

Identificação de fluxo:

As colunas cromatográficas geralmente são marcadas com setas de fluxo e devem ser instaladas corretamente na direção da seta para evitar o rebote.

Os tubos de conexão devem ser combinados com a junção de coluna cromatográfica para evitar uma queda ou vazamento de coluna devido a uma combinação inadequada.

Lavagem inicial:

Antes da instalação de uma nova coluna cromatográfica, é necessário usar um solvente orgânico puro (como acetonitril ou metanol) a baixa velocidade de fluxo (0,1 mL/min) para lavar e aumentar gradualmente a velocidade de fluxo para a velocidade de análise convencional para remover as impurezas da coluna e evitar que as bolhas entrem no sistema de detecção.

2- Fluxo e equilíbrio

Compatibilidade de fluxo:

Antes de substituir a fase de fluxo, certifique-se de que a nova fase de fluxo é compatível com o solvente atual na coluna cromatográfica. Se o fluxo contém sal tampão, primeiroEnxague a mistura de água/solvente orgânico 5 vezes o volume da coluna e introduza a fase de fluxo tampão.

Evite o uso direto de alta proporção de fase orgânica quando a concentração de sal é excessivamente alta na fase de fluxo, para evitar que a precipitação de sal cause obstrução da coluna cromatográfica.

Tempo de equilíbrio:

A coluna de cromatografia inversa requer pelo menosA fase de fluxo de 10 vezes o volume da coluna é equilibrada até que a pressão esteja estável com a linha de base.

Controle das condições operacionais:

Pressão e velocidade:

Para evitar mudanças drásticas de pressão, a velocidade de fluxo deve ser ajustada lentamente. A velocidade de fluxo deve ser ajustada de acordo com as especificações da coluna cromatográfica para evitar exceder a coluna cromatográfica.* Grande pressão permitida.

Gestão da temperatura:

Evitar mudanças no ciclo de temperatura, o aumento da temperatura da coluna pode reduzir a pressão do sistema, mas não é aconselhável reduzir excessivamente a pressão aumentando a temperatura da coluna.

gama de pH:

Recomendação de coluna de cromatografia inversaO pH varia de 1 a 12, mas as condições extremas de pH (como pH≥8) podem acelerar a hidrolise de fase ligada e a dissolução de silicone, reduzindo a temperatura de uso e reduzindo o tempo de operação.

4. Tratamento de amostras

Limpeza da amostra:

As impurezas nas amostras são a principal fonte de poluição da coluna cromatográfica. Recomendado uso de extração de fase sólida (Um sistema de extração de fluido supercrítico (SFE) ou coluna pequena (SPE) purifica a amostra.

Amostras necessárias0,2 μm filtragem de membrana de filtro para garantir que o material da membrana de filtro é compatível com o solvente da amostra, evitando que a membrana de filtro dissolva a coluna cromatográfica poluida.

Escolha do solvente:

O solvente da amostra deve ser compatível com o fluxo para evitar a precipitação após a amostra ou a insolvência do solvente. Recomenda-se dissolver amostras com a fase de fluxo ou soluções com uma força de lavagem mais fraca do que a fase de fluxo para obter uma excelente forma de pico e sensibilidade de detecção.