O rigoroso seguimento das especificações operacionais acima pode melhorar significativamente a densidade de bactérios (tipicamente até OD600 = 8-12), a taxa de rendimento do produto e a vida útil do equipamento. Na prática, é necessário estabelecer processos padronizados com características fisiológicas de cepas específicas e executar registros para otimização retrospectiva.

Abaixo estão os detalhes do uso do agitador de bactérias líquidas e as principais descrições:

Preparação prévia e manuseio de recipientes

1. Seleção de recipientes e esterilização

É preferido usar garrafas triangulares (comumente usadas ​​250-500 mL) ou tanques de fermentação de barra, de acordo com o volume de cultura em uma proporção que não exceda 70% do volume do recipiente. Os vasos de vidro precisam ser esterilizados por vapor de alta pressão de 121 ° C por 30 minutos, e as garrafas de plástico podem ser esterilizadas por fumigação de epóxido de etano para evitar que os inibidores residuais afetem o crescimento das bactérias.

2. Preparação do meio de cultivo

Configure o meio de cultura adequado de acordo com as propriedades da cepa (por exemplo, o meio LB para E. coli) e regule o pH inicial (bactérias gerais pH 6.8-7.2, poliacidez fúngica). Para enriquecer metabólicos específicos, indutores ou precursores podem ser adicionados.

Especificações de vacinação e carga

1. Operação estéril

Para concluir a vacinação dentro do gabinete de segurança biológica, retirar o tampão de algodão após a chama queimar a boca da garrafa, acessar a quantidade apropriada de bactérias (cerca de 5% -10% da quantidade de vacinação), fechar rapidamente e passar pela janela de transmissão para a cama de agitação. Observe que o tempo de operação é controlado dentro da faixa eficaz da chama da lâmpada de álcool.

2. Carga equilibrada simétrica

Coloque o recipiente com o líquido bacteriano simétricamente no agitador para garantir o equilíbrio da carga. As cargas eccentricas podem causar vibrações anormais do motor e reduzir a vida útil da máquina. Recomenda-se o uso de blocos de pesagem para preencher os espaços vazios em cultivos de grande capacidade.

Definição de parâmetros e monitoramento

1. Controle de temperatura

De acordo com a configuração da temperatura de crescimento ideal da cepa (por exemplo, mofo 30 ° C, termofílos 55 ° C), a função de pré-aquecimento é iniciada para que a diferença de temperatura dentro da cavidade seja ≤ ± 0,5 ° C. Verifique a temperatura real a cada quatro horas durante longos períodos de funcionamento para evitar falhas no controle da temperatura que causem a morte de bactérios.

2. Ajuste de velocidade

Equilibrar a eficiência da dissolução de oxigênio e danos de corte: 200-300 rpm para o horópio comum, o fungo filamentoso pode ser ajustado a menos de 150 rpm; A cultura anaeróbica deve ser reduzida a 80-120 rpm e o gás substituído pelo nitrogênio é carregado. Observe a formação de espuma e adicione desespumante, se necessário.

3. Gestão de procedimentos de tempo

Adotar estratégia de controle de tempo segmentado: período de atraso (0-6h) adaptação de baixa velocidade, aumento do logaritmo para a velocidade de rotação alvo, o período estável diminui a velocidade para prolongar a fase de formação de enzimas / esporos. Defina o programa de desaceleração com 15 minutos de antecedência para evitar que uma parada abrupta desencadeie um choque de turbulência.

Gestão de processos operacionais

1. Inspeção de Estado

Verifique os seguintes itens a cada hora: ① se o dispositivo fixo está solto; ② abertura suave da abertura de emissão de água de condensação; Alterações na altura da superfície do líquido dentro da garrafa (avaliar a taxa de evaporação); Sonido ou cheiro anormal.

2. Controle do tempo dos suplementos

Usando uma estratégia de adição de fluxo intermitente, quando o eletrodo DO mostra uma queda abrupta do oxigênio dissolvido, a fonte de carbono / nitrogênio é suplementada por tubos de silicone estériles. O volume do suplemento não excede 10% do volume de trabalho de uma só vez, evitando mutações de pressão de penetração.

3. Controle da poluição

O aumento anormal da turbidez foi encontrado para terminar imediatamente a cultura e amostrar para verificar a poluição. Em caso de poluição grave, a parede interna da cama de agitação deve ser limpa primeiro com um desinfetante e, em seguida, pode continuar a ser usada após 30 minutos de exposição a raios ultravioletas.

V. Colheita e tratamento posterior

1. Técnicas de amostragem

Usar a amostragem lateral com a aspiração arco ou seringa para evitar perturbar o sedimento do fundo. Antes e depois da amostragem, a pesagem registra as mudanças no peso úmido e converte a curva de acumulação de biomassa.

2. Tratamento de resíduos

O recipiente de pressão deve ser aberto antes de baixar a pressão e a cultura contendo o patogênio deve ser liberada após 30 minutos de inativação a 121 ° C. As fixações metálicas são desinfetadas com 75% de etanol e as peças de plástico são substituídas por um saco de lixo especial selado.

3. Manutenção do equipamento

Limpar a poeira do filtro do ventilador mensalmente, revisão trimestral da tensão do cinto de transmissão. Esvazie o tanque e aplique a resina de silício contra a ferrugem quando não estiver em uso por muito tempo, e o ecrã digital é coberto com uma tampa de proteção contra a poeira.