I. Introdução

• SF9As células de insetos são uma importante linhagem de eunucitos derivada do tecido do ovário da mariposa nocturna da grama, cujo princípio de cultivo é a expressão de altos níveis de proteína recombinante através da simulação do ambiente fisiológico no organismo dos insetos (temperatura adequada, nutrientes e troca de gases) para apoiar a proliferação celular e servir como hospedeiro do varicóvirus.

Configuração comum:

• Temperatura:27℃

• Velocidade:120-140 rpm(Cultivação em suspensão)

II. Detalhes do programa

• Cenas típicas:

SF9A aplicação principal das células é associada ao sistema de expressão do botovírus (comoBac para BacA combinação de sistemas para altos níveis de expressão de proteínas recombinantes complexas, partículas semelhantes a vírus e antígenos de vacinas é uma ferramenta importante na biofarmacêutica e na pesquisa básica.

• Parâmetros e princípios de configuração:

Temperatura:SF9A temperatura da cultura celular deve ser rigorosamente controlada.26-28A temperatura é geralmente definida como27℃. Isso ocorre porque as células de origem de insetos têm temperaturas de crescimento muito mais baixas do que as células de mamíferos. A temperatura é um fator-chave que afeta o crescimento celular e a expressão de proteínas, uma vez que a temperatura da cultura excede30Isso provocará estresse térmico celular, estagnação do crescimento e até morte em massa, causando danos irreversíveis. Por isso, a calibração da temperatura e o monitoramento contínuo da incubadora são essenciais.

Velocidade:Durante a cultura em suspensão, a velocidade de rotação é geralmente definida em120para140 rpmno âmbito. Essa velocidade de rotação garante que as células sejam suspensas uniformemente no meio, evitando a deposição e fornecendo uma troca de gases adequada para o crescimento celular (transmissão de oxigênio). Velocidade de rotação muito baixa pode levar a agregação celular e deficiência de oxigênio; Excesso de altura produz uma força de corte excessiva, causando danos mecânicos às células. Além disso, para garantir a eficiência da troca de gás, o volume de cultivo geralmente não excede a capacidade total da garrafa de agitação.2/5- É.

• Observações e pontos operacionais:

RealizarSF9Durante a cultura celular, os seguintes pontos exigem atenção especial:

1. Sensibilidade à temperatura:SF9As células são extremamente sensíveis à temperatura. A temperatura de cultivo não deve ser superior a30C, caso contrário, causará danos irreversíveis às células. Mesmo em operações de curta separação do ambiente de cultivo, como a recuperação, deve ser concluída o mais rápido possível, evitando a colocação por longos períodos a temperatura ambiente ou a temperatura superior.

2. Evitar danos mecânicos:SF9As células são muito sensíveis a forças mecânicas como o soprado e as bolhas. Todas as operações, como a suspensão, a transmissão, devem ser realizadas com suavidade, tentando evitar a geração de excesso de bolhas para manter a alta vitalidade das células.

3. Observação celular:Durante a cultura, algumas partículas pretas dentro da célula foram observadas como fenômenos normais, que são as próprias bolhas secretórias da célula e a refração dos órgãos celulares. Após um período de cultivo na parede, algumas células podem estender um táctil mais longo, o que também não é um sinal de poluição ou mau estado. Se os fragmentos extracelulares aumentarem, podem ser removidos por meio de troca de fluido centrífugo de baixa velocidade.

4. Recuperação e congelamento:Recomendação após a recuperação24Substitua o meio fresco uma vez por hora para remover as substâncias perigosas liberadas pelas células mortas. Recomenda-se o uso de caixas de refrigeração de procedimento durante o congelamento e reanimação regular para verificar a atividade das células em estoque para garantir a qualidade do banco de células de sementes.

III. Origem da literatura

1. O'Reilly, D. R., Miller, L. K., & Luckow, V. A. (1992). Vectores de expressão de baculovírus: um manual de laboratório. W.H. Freeman e Companhia

   Descrição: Este livro é um manual clássico no campo do sistema de expressão do botovírus e descreve em detalhes:SF9Inclui a biologia básica das linhas celulares de insetos, métodos de cultura e processos experimentais de transfeção e infecção.

2. Luckow, V. A., & Summers, M. D. (1988). Tendências no desenvolvimento de vetores de expressão de baculovírus. *Bio/Tecnologia, 6*(1), 47-55.

   Descrição: Este sistema de artigos de revisão de alto impacto analisa a história do desenvolvimento do veículo do botovírus e esclareceSF9Linhas celulares etárias desempenham um papel fundamental na otimização do sistema.