Dissolvedor de péptidosO uso operacional abrange a calibração e preparação do equipamento, o processamento de reagentes e amostras, a execução da reação de fissura, a purificação do produto e a manutenção do equipamento.Dissolvedor de péptidosOs passos operacionais e precauções específicas são os seguintes:

Calibração e preparação do equipamento

Verificação da integridade dos componentes

Verifique se os cabos de alimentação, reatores, bombas, válvulas e outros componentes estão intactos antes da inicialização para garantir que não haja danos ou afluxamentos. Por exemplo, se o anel de vedação do reator for encontrado envelhecido, deve ser substituído imediatamente para evitar vazamentos de gás durante o processo de fissura.

Verifique que a garrafa de armazenamento de solventes esteja bem ligada ao tubo de gás e que não haja vazamentos. Verifique se a pressão do ar comprimido (AIR) está entre 60 e 100 psi e a pressão do nitrogênio (N2) entre 5 e 10 psi.

Calibração de parâmetros

Defina a temperatura de fissura, a pressão, a velocidade de fluxo e outros parâmetros de acordo com as necessidades experimentais. Por exemplo, a temperatura deve ser controlada com precisão em 37 ° C durante a lisis enzimática e a variação não deve exceder ± 0,5 ° C.

Calibre regularmente os sensores de temperatura (uma vez por semestre, o erro deve ser controlado dentro de ± 0,2 ° C) e os sensores de pressão (uma vez por ano) para garantir a precisão dos dados.

Equipamento de pré-aquecimento

Ligue a fonte de alimentação do sintetizador e pré-aqueça o dispositivo até a temperatura de reação definida. O tempo de pré-aquecimento varia de acordo com o modelo do dispositivo e a temperatura, o que requer paciência.

Reagentes e tratamento de amostras

Preparação do Reagente

Prepare o lito (por exemplo, TFA/água/triisopropilsilano = 95:2,5:2,5), o reagente ativador (por exemplo, HBTU, DCC), o solvente (DMF, DCM), etc. para garantir que todos os materiais sejam frescos e puros, evitando a introdução de impurezas.

Confirmar que o reagente não se precipita ou deteriora, recomenda-se o uso de reagente de filtragem pré e marcar a data de abertura para que o reagente expirado seja descartado oportunamente.

pré-tratamento da amostra

Pré-tratamento de amostras de alta viscosidade ou contendo partículas por centrifugação, filtragem, etc. para evitar bloqueio da cavidade de fissura ou danos ao corpo da bomba. Por exemplo, amostras não pré-tratadas podem causar um aumento de 40% na taxa de desgaste do corpo da bomba.

Execução da reação de fissura

Fixação de resinas e aminoácidos

Escolha o veículo de fase sólida adequado, como a resina de amida Rink, infle a resina com diclorometano (DCM) e seque a reposição após remover as impurezas.

Os aminoácidos alvo são misturados com o reagente ativador para formar o éster ativo e colocados no reator, ligando-se aos aminoácidos desprotegidos para formar ligações peptídicas.

Reação de fissura

Adicione um lito pré-refrigerado (por exemplo, mistura de TFA) e agite a temperatura ambiente por 2 horas. Durante o processo de fissura, é necessário monitorar em tempo real a temperatura, a pressão e outros parâmetros para detectar uma inspeção de parada anormal e oportuna.

Após a fissura, liberte o líquido de reação, filtre para remover a resina e lave a resina 3 vezes com solventes como TFA, fundindo o filtro.

Purificação do produto

Concentração e precipitação

O lito é transferido para um evaporador rotativo e concentrado em pequenos volumes a temperatura ambiente, adicionando metil-tert-butil éter (MTBE) para precipitar o polipéptido.

Coleta o precipitado por centrifugação (10.000 rpm, 10 min), lava 3 vezes com éter frio e seca até o péptido grosso.

Purificação por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)

Purificação com coluna de fase inversa C18 com 0,1% TFA/água na fase de fluxo A e 0,1% TFA/acetonitril na fase de fluxo B. Sob condições de lavagem gradiente (fase B aumenta de 10% para 60% em 0-30 minutos), coletar picos alvo.

Após a purificação por HPLC, a pureza do polipéptido pode ser aumentada de 85% para 98%.

V. Manutenção e manutenção de equipamentos

Limpeza diária

Após cada uso, lavar a parede interna do reator com água deionizada para remover resíduos de litos e resíduos de proteínas. Para manchas persistentes, pode ser escovado depois de mergulhar com detergente enzimático.

As tubulações são recicladas semanalmente com solução de etanol a 75% ou hipoclorato de sódio a 0,1% para evitar a proliferação de micróbios. Depois da desinfecção, é necessário secar o tubo com nitrogênio.

Substituição de peças frágeis

Verifique a elasticidade do anel de vedação a cada três meses e, se houver endurecimento ou rachadura, deve ser substituído imediatamente. Troque o filtro de entrada de ar a cada 1-2 meses para evitar que a poeira entre no interior do equipamento.

Para reduzir o desgaste por atrito, adicionar lubrificantes especializados (por exemplo, graxas à base de silício) trimestralmente a componentes móveis como bombas, válvulas e outros.

Gestão de armazenamento a longo prazo

Quando não estiver usando o dispositivo, guarde-o em um lugar seco, ventilado e protegido da luz, evitando a luz solar direta e ambientes úmidos. Certifique-se de que o equipamento esteja longe de gases e líquidos corrosivos.

Aplique um óleo anti-ferrugem (por exemplo, vaselina) na superfície metálica do dispositivo e cubra a tampa anti-poeira.