As células liberam diferentes tipos de vesículas derivadas da membrana no ambiente extracelular. Estes vesículos de origem membrana são conhecidos como vesículos extracelulares (EV), incluindo exossomas e microvesículos. Os exossomas são vesículas extracelulares relativamente pequenas (30-150 nm) que podem transferir macromoléculas biológicas como ácidos nucleicos, proteínas, enzimas e lípidos entre células e são um padrão importante de comunicação intercelular. Além disso, eles podem ser usados ​​como biomarcadores para uma variedade de doenças e também como sistemas de transporte natural de medicamentos para a próxima geração de agentes terapêuticos.

Neste artigo, descrevemos uma maneira rápida e simples de separar exossomas de células-tronco de origem adiposa, combinando centrífugas de alta e supervelocidade. Células em BioBLU ® 0,3c cultivado em um tanque de reação biológica descartável e DASbox ® Controle do sistema do mini biorreator. O sistema de mini-biorreator DASbox pode cultivar um grande número de células-tronco para obter exossomas de alto rendimento. Em seguida, utilizamos uma centrífuga CR22N para limpar o meio condicionado. É uma centrífuga de alta velocidade com RCF de até 32.300 x g. Neste artigo, usamos uma rotação angular fixa R15A que pode acomodar tubos conicos de 10 x 50 mL e 10 x 15 mL simultaneamente. Para concentrar ainda mais os exossomas, usamos uma centrífuga superrápida CP100NX com um RCF máximo de 803.000 x g e um rotor horizontal P32ST com capacidade para tubos centrífugos de 6 x 40 mL. Além disso, em comparação com o grupo de controle que não usou o amortecedor de sacarose, o uso do amortecedor de sacarose na etapa de supercentrifugação permitiu a separação rápida de exossomas puros e uniformes. Utilizamos rotores de grande capacidade durante todo o processo de centrifugação, reduzindo as etapas de centrifugação repetidas e reduzindo o tempo de separação dos exossomas para menos de 4 horas, mais rápido do que outros métodos de separação, como precipitação ou filtração.