Cromatográfica líquida de laboratórioA calibração de medição é um processo que envolve vários aspectos, abaixo estão as etapas detalhadas e precauções:

I. Condições ambientais

Antes de realizar a calibração do cromatográfico líquido, as condições ambientais devem ser asseguradas para cumprir os seguintes requisitos:

A temperatura ambiente deve ser mantida em (15 ~ 30) °C, e a mudança de temperatura durante o processo de calibração não deve exceder 3 ° C (para o detector de refração diferencial, a mudança de temperatura ambiente não deve exceder 2 ° C).

A umidade relativa interna deve ser mantida em (20-85)%.

Não é permitido armazenar artigos inflamáveis, explosivos ou fortemente corrosivos no quarto.

Sem vibrações mecânicas e interferências eletromagnéticas evidentes e com boa ventilação.

Substâncias padrão e equipamentos de calibração

A substância padrão nacional certificada deve ser usada e assegurar que o equipamento de calibração seja aprovado por medição. As substâncias padrão mais usadas incluem:

A substância padrão em solução de naftal-metanol é avaliada em 1,00 x 10^-4g/mL, com incerteza de extensão inferior a 4%.

Substância padrão em solução de colesterol metanol, valor padrão de 200 μg / mL, incerteza de extensão inferior a 2,0%.

Outras substâncias padrão selecionadas de acordo com as necessidades específicas de calibração.

Os equipamentos de calibração podem incluir pipetas, garrafas de capacidade, termómetros, etc.

Passos de calibração

Calibração do sistema de infusão

Resistência à pressão da bomba: Conecte as partes do instrumento bem, com metanol (ou água pura) como fase de fluxo, a velocidade de fluxo é ajustada para 0,2 mL / min. Inicie o instrumento e mantenha a pressão estável durante 10 minutos para verificar se há vazamentos em todas as interfaces de tubulação. Retire a coluna cromatográfica, bloqueie a saída da bomba para que a pressão chegue a 90% do valor máximo permitido e mantenha por 5 minutos para confirmar que não há vazamento.

Erro de configuração do fluxo da bomba e estabilidade do fluxo: definir a velocidade de fluxo conforme necessário, iniciar o instrumento e esperar que a pressão esteja estável, coletar a fase de fluxo na saída da fase de fluxo com uma garrafa de capacidade limpa, medir o tempo e pesar, calcular a velocidade de fluxo medida. Repita a calibração 3 vezes para garantir a precisão.

Erro de gradiente: Defina um procedimento de lavagem de gradiente para desenhar e calcular a curva de variação de gradiente com solventes A (como água) e B (como solução aquática com acetona a 0,1%).

2.Correção de erro e estabilidade do ponto de definição da temperatura da caixa de colunas

Coloque a sonda do termômetro digital no mesmo local do termostato da coluna cromatográfica.

Selecione a temperatura definida (por exemplo, 35 ° C e 45 ° C), registre as leituras depois que a temperatura estiver estável e registre uma vez a cada 10 minutos, para um total de sete vezes.

A diferença entre a média e o valor definido é calculada como o erro do valor definido da temperatura da coluna, e a diferença entre o valor máximo e o valor mínimo em sete leituras é calculada como a estabilidade da temperatura da coluna.

3. Calibração do detector

Tome o detector de luz visível ultravioleta e o detector de matriz de diodos, por exemplo, para conectar as partes do instrumento e escolher a coluna cromatográfica e a fase de fluxo adequadas.

Defina os parâmetros de medição adequados, como comprimento de onda, sensibilidade, etc.

Depois da estabilização da linha de base, injete um determinado volume de solução de substância padrão (por exemplo, solução de naftal-metanol de 1,0 x 10^-4 g / mL) para medir e registrar continuamente o tempo de retenção e a área do pico cromatográfico.

Calibração de precisão de volume de amostragem (se aplicável)

Pode ser aplicado o método de calibração padrão, o método de pesagem, o método de calibração de anel quantitativo ou o método de comparação com o amostrador padrão.

Método de calibração padrão: Use uma solução padrão de concentração conhecida para fazer múltiplas amostras para registrar os valores de resposta do pico cromatográfico e calcular a precisão do volume de amostragem.

Pesagem: O volume de solvente realmente absorvido é calculado através da pesagem e comparado ao volume definido.

Calibração do anel quantitativo: Verifique a precisão do volume do anel quantitativo e julgue-o observando a forma do pico cromatográfico e os valores de resposta.

Comparação com o amostrador padrão: Análise comparativa com o amostrador padrão, cálculo do desvio do volume de amostragem e ajuste.

Registros e relatórios de calibração

Os dados e observações devem ser registrados detalhadamente durante o processo de calibração.

Uma vez concluída a calibração, um relatório de calibração deve ser preparado, incluindo a data de calibração, as condições ambientais, o equipamento de calibração, as etapas de calibração, o registro de dados e os resultados da análise.

Os relatórios de calibração devem ser auditados e assinados por profissionais.

V. Atenção

Os procedimentos operacionais e as normas de segurança devem ser rigorosamente cumpridos durante o processo de calibração.

As substâncias padrão devem ser usadas para garantir a sua validade e conservação adequada.

Os equipamentos de calibração devem ser mantidos e verificados regularmente para garantir sua precisão.

A calibração metrológica de um cromatografo de fase líquida de laboratório é um processo complexo e sofisticado que exige que profissionais sigam rigorosamente os procedimentos operacionais para garantir a precisão e confiabilidade do instrumento.