O uso correto e a manutenção das colunas cromatográficas são importantes, e um pouco de imprudença pode reduzir o efeito da coluna, reduzir a vida útil e até danificar. Durante a manipulação cromatográfica, é necessário prestar atenção aos seguintes tópicos para manter a coluna cromatográfica.

Evite mudanças drásticas de pressão e temperatura e quaisquer vibrações mecânicas. Uma mudança súbita de temperatura ou fazer com que a coluna cromatográfica caia de cima pode afetar a condição de enchimento dentro da coluna; O aumento ou a redução súbita da pressão da coluna também impulsionará o preenchimento da coluna, portanto, a velocidade de fluxo deve ser ajustada lentamente, e a rotação da válvula não pode ser demasiado lenta quando a válvula entra na amostra (como descrito anteriormente).

A composição do solvente deve ser gradualmente alterada, especialmente na cromatografia de fase inversa, não deve ser mudada diretamente do solvente orgânico para a água e vice-versa.

3 Em geral, a coluna cromatográfica não pode ser recolhida, apenas quando o fabricante indica que a coluna pode ser recolhida, pode ser recolhida para remover as impurezas que permanecem na cabeça da coluna. Caso contrário, a recuperação reduzirá rapidamente o efeito da coluna.

Escolha a fase ativa apropriada (especialmente o pH) para evitar a destruição da fase fixa. Às vezes, uma pré-coluna pode ser ligada à frente do amostrador, quando a coluna de análise se liga ao silicone, a pré-coluna é silicone, que pode permitir que a fase ativa seja pré-saturada com silicone antes de entrar na coluna de análise, evitando que a matriz de silicone na coluna de análise seja dissolvida.

5 Evitar a injeção direta de amostras de matriz complexa, especialmente amostras biológicas, na coluna, a amostra precisa ser pré-tratada ou conectada a uma coluna de proteção entre o introdutor e a coluna cromatográfica. As colunas de proteção são geralmente colunas curtas preenchidas com uma fase fixa semelhante. As colunas de proteção podem e devem ser substituídas com frequência.

• Frequentemente lavar a coluna cromatográfica com um solvente forte para remover as impurezas mantidas dentro da coluna. Durante a limpeza, a substituição da fase ativa no sistema de fluxo deve ser gradualmente transformada por um solvente dissolvido em fase, e o volume de cada fase ativa deve ser cerca de 20 vezes o volume da coluna, ou seja, a análise convencional precisa de 50 a 75 ml.

Abaixo estão listados alguns solventes de limpeza e a ordem das colunas cromatográficas, como referência: colunas de silicone são lavadas com metano (ou heptano), diclorometano e metanol, em seguida, na ordem oposta, todos os solventes devem ser rigorosamente desidratados. O metanol pode ser lavado para os resíduos de impurezas polares fortes e o etano reativar a superfície do silicone. A coluna de fase inversa é lavada com água, metanol, acetonitril, monoclorometano (ou cloroformo) e, em seguida, na ordem oposta. Se a fase de atividade utilizada na análise seguinte não contém tampão, pode ser omitida a etapa de lavagem com água após o zui. O monoclorometano pode ser lavado para as impurezas não polares residuais, e a injeção repetida de 100 a 200 μl de tetrahidrofurano várias vezes durante a lavagem com metanol (acetonitril) ajuda a remover as impurezas fortemente hidrofóbicas. Uma solução misturada de tetrahidrofurano com acetitril ou metanol pode remover os lipoides. Às vezes, o dimetalino também é injetado várias vezes. Além disso, a lavagem gradiental com acetonitril, acetona e ácido trifluoroacetico (0,1%) elimina a contaminação das proteínas.

A coluna de troca de aniões pode ser lavada com tampão de ácido diluído, a coluna de troca de aniões pode ser lavada com tampão de álcali diluído, eliminando o sal com forte desempenho de troca e, em seguida, com água, metanol, diclorometano (excluindo a adsorção de substâncias orgânicas na superfície de fase fixa), metanol e água.

Durante a manutenção da coluna cromatográfica, a coluna deve ser coberta de nitril acetico ou metanol, e a junção da coluna deve ser apertada para evitar que o solvente se seque. É totalmente proibido deixar a solução tampão na coluna durante a noite ou por mais tempo.

Durante o uso da coluna cromatográfica, se a pressão aumentar, um filtro sinterizado pode estar bloqueado, o filtro deve ser substituído ou removido para limpeza; Outra possibilidade é que as grandes moléculas entrem na coluna, contaminando a cabeça da coluna; Se o efeito da coluna for reduzido ou o pico cromatográfico for deformado, a cabeça da coluna pode colapsar e o volume morto aumentar.

Quando as duas últimas circunstâncias ocorrem, afaste cuidadosamente a junção da coluna e retire o preenchimento da cabeça da coluna de 1 a 2 mm de altura com um pequeno aço limpo (tome cuidado para limpar o preenchimento contaminado) e nivele o preenchimento da coluna. Em seguida, encha a coluna cromatográfica com a fase fixa úmida com o solvente apropriado (a mesma que dentro da coluna), aplace e, em seguida, aperte a junção da coluna. Desta forma, o desempenho da coluna posterior é melhorado, mas é difícil voltar ao nível da nova coluna.