Os fatores que afetam o desempenho da coluna cromatográfica são:I. Fatores físicos:
(1) Pureza do silicone: a pureza do silicone e a concentração de íons metálicos residuais, as impurezas do silicone afetarão a forma de pico do composto, o alto teor de metal na superfície do silicone afetará a forma de pico do composto alcalino, e é fácil ocorrer atraso.
(2) o comprimento e o diâmetro interno da cama de enchimento do tamanho da coluna cromatográfica, aumentando o comprimento da coluna cromatográfica, pode melhorar o efeito da coluna em certa medida, mas também aumentará a pressão e levará à largura do pico; Diâmetro de coluna larga, aumentando a carga da amostra, mas também aumentará a difusão horizontal, o que também levará à largura do pico. O diâmetro estreito da coluna pode economizar solventes e reduzir a difusão horizontal, mas a pressão é maior e os requisitos do sistema são maiores.
(3) forma de partícula e tamanho de partícula esférica coluna de alta eficiência, boa reprodutividade, estrutura uniforme do leito de coluna, estrutura irregular do leito de coluna desigual, velocidade de fase de fluxo desigual, fácil largura de banda espectral; Quanto menor for o diâmetro médio da partícula, maior será o efeito da coluna e maior será a pressão da coluna. Quanto maior a distribuição do tamanho das partículas, menor o efeito da coluna e maior a pressão.
(4) Área da superfície da partícula: a soma da superfície externa da partícula e da superfície do furo interno, expressa em m2 / g, a área de superfície relativamente alta para a amostra tem uma forte capacidade de retenção, maior capacidade de coluna e grau de separação. A área de superfície baixa pode alcançar o equilíbrio mais rapidamente e é mais adequada ao processo de lavagem de gradientes.
(5) Diâmetro do orifício: o tamanho médio do orifício ou cavidade da partícula, o intervalo é de 80 a 300. As partículas de preenchimento com grandes orifícios podem prolongar o tempo de retenção do solúvel macromolecular na superfície do preenchimento e melhorar a separação, de modo que o preenchimento com grandes orifícios é adequado para separar compostos macromoleculares ou moléculas de maior volume hidrodinâmico.
II. Fatores químicos:
(1) Tipo de ligação e fase de ligação: a molécula de fase de ligação é ligada ao ponto único do matriz como ligação monomérica, este método de ligação pode melhorar a taxa de transmissão de massa e reduzir o tempo de equilíbrio da coluna; A ligação polimérica liga moléculas de fase a múltiplos pontos do matriz, o que aumenta a estabilidade da coluna cromatográfica e aumenta o volume de amostra. Diferentes ligações afetam diretamente o comportamento de retenção dos compostos.
Cobertura de carbono: uma alta cobertura de carbono pode melhorar a resolução e a reprodutividade, mas a análise dura muito tempo.
(3) Fechamento: o preenchimento de fase de ligação de silicone tem hidroxilo de silício residual parcialmente não selado, como a vedação pode aliviar a reação de hidroxilo de silício ácido dos componentes a serem testados com os resíduos da superfície do silicone, melhorando a retenção e a linha de pico, o que é especialmente importante para os compostos alcalinos. Diferentes técnicas de vedação também afetam diretamente o desempenho da coluna cromatográfica.