A seleção de colunas cromatográficas, como um componente central do sistema de análise cromatográfica, afeta diretamente a eficiência da separação, a precisão da análise e o ciclo de desenvolvimento do método. Os pontos-chave da compra de colunas cromatográficas são descritos a partir de várias dimensões:

Definição das necessidades experimentais e objetivos analíticos

- Localização de objetivos analíticos

- Análise qualitativa exige alta separação e efeito de coluna, a escolha prioritária de coluna cromatográfica com alto número de torres teóricas;

- Análise quantitativa com foco em repetitividade e estabilidade, deve ser escolhido um modelo de boa reprodutividade entre lotes;

- A preparação de cromatografia requer um volume de amostra de alta carga, recomenda-se um grande diâmetro interno (por exemplo, mais de 10 mm) e uma coluna cromatográfica de enchimento de grandes partículas.

Adaptação da natureza da amostra

Compostos polares não/fracos: colunas C18 ou C8 de fase inversa;

- Compostos polares fortes: coluna oposta ou coluna inversa polarizada opcional;

- Substâncias iônicas: utilização de colunas cromatográficas de troca iônica;

- Bio-macromoléculas: Exige barreiras dimensionais com grandes aberturas (≥300 Å) ou colunas de gel específicas.

Avaliação dos principais parâmetros de desempenho

Otimização de parâmetros físicos

Comprimento da coluna e diâmetro interno: análise comum de 150 mm x 4,6 mm, amostras complexas podem ser estendidas até 250 mm para melhorar a separação, mas a pressão da coluna deve ser equilibrada com o custo do tempo;

- Tamanho de partícula de embalagem: 5 μm é adequado para HPLC convencional, 3,5 μm abaixo é adequado para fase líquida ultra eficiente (UPLC), a redução do tamanho de partícula pode melhorar a eficiência da coluna, mas aumentar a contrapressão;

Selecção de abertura: pequenas moléculas (<1000Da) são aplicáveis ​​80-120Å, grandes moléculas (como proteínas) precisam de mais de 300Å para garantir o grau de liberdade de difusão.

Indicadores de propriedade química

Pureza do silicone: o silicone de alta pureza pode reduzir o atraso de compostos alcalinos causado por impurezas metálicas;

- Processo de ligação: ligação monomérica rápida, alta estabilidade de ligação polimérica; A cobertura de carbono afeta a capacidade de retenção, e a quantidade elevada de carbono é adequada para substâncias não polares;

- Tratamento de fechamento: reduz a interferência residual de hidroxi de silício e melhora a forma de pico do composto polar.

Comparação de instrumentos e condições de operação

Verificação da compatibilidade do dispositivo

- Cromatográfico líquido: confirmar se a pressão máxima da bomba cumpre os requisitos de uma coluna de partículas pequenas;

- Cromatográfico de gás: verificar a selagem da abertura da amostra e a precisão do controle da temperatura da caixa de temperatura da coluna].

Fase de fluxo e pH

- Coluna de matriz de silicone: tolerância de pH padrão de 2-8, pode ser expandida para 1-12 após modificações especiais;

Colunas de polímeros: ampla adaptabilidade ao pH (1-14), mas atenção aos problemas de inflação causados ​​por solventes orgânicos.

Consideração do custo-benefício e manutenção a longo prazo

- Análise custo-benefício

- Coluna de alto desempenho: embora o preço unitário seja alto, a vida útil é longa e a eficiência de separação é alta, adequada para a detecção de alta frequência;

- Mecanismo de teste: Evitar compras cegas testando o efeito real da separação através de pequenas amostras fornecidas pelo fornecedor.

- Design de manutenção de conveniência

- Controle da poluição: escolha um enchimento fácil de limpar (por exemplo, partículas esféricas) e enxague regularmente com um solvente forte;

- Modo de armazenamento: desativação de curto prazo pode ser mergulhada em conservação de álcool, inatividade de longo prazo requer armazenamento selado seco.

5 – Evitar erros comuns

- Rejeitar a “teoria apenas da marca”: o pilar da produção doméstica já realizou a substituição das importações em algumas áreas, exigindo parâmetros de contraste e não apenas a origem;

Cuidado com a armadilha "universal de uma coluna": colunas do mesmo tipo (como C18) podem levar a resultados muito diferentes devido a diferenças no processo de ligação e devem ser selecionadas de forma específica.