As colunas de cromatografia inversa podem ter várias falhas durante o uso, e aqui estão as soluções para essas falhas:

A pressão aumenta anormalmente

1. bloqueio de tela

- Desempenho: aumento ou flutuação significativa da pressão da coluna.

- Solução: retire a placa de filtragem, coloque-a em ácido nítrico diluído a 10% para limpeza por ultra-som durante 10 minutos e reinstale após lavagem com água pura. Também pode ser usado um solvente forte para lavagem inversa. Cuidado para evitar choques positivos de alta pressão.

2. Contaminação de embalagens

- Desempenho: o preenchimento da cabeça do cilindro é coberto por uma forte retenção de substâncias, levando à diminuição do efeito do cilindro.

- Resolução: Torque a junção da coluna, escave o preenchimento contaminado da superfície, substitua-o por um novo preenchimento e compacte-o. Este método restaura parcialmente o efeito da coluna, mas é difícil alcançar novos níveis de coluna.

3. cristalização do sal

- Desempenho: quando a fase de fluxo contém alta concentração de solvente orgânico, o cristal do sal tampão bloqueia o fluxo.

- Solução: primeiro dissolva o sal com metanol/água de baixa concentração e depois alterne para a fase orgânica de alta concentração.

A redução do efeito de separação

1. Anomalidade do pico

- Cauda de arrasto / garfo: devido ao colapso da cabeça do cilindro ou aumento do volume morto, é necessário preencher o mesmo tipo de preenchimento e aplastar. Se por causa da poluição metálica, substitua a coluna de silicone de alta pureza.

- Pico fantasma: os resíduos de poluentes fluem a altas temperaturas e podem ser removidos pela elevação da temperatura final da coluna cromática de cozimento.

2. Redução do efeito da coluna

Causa: perda de fase fixa ou dissolução de silicone.

Solução: otimize o pH da fase de fluxo (recomendação 2-9), evitando que as condições alcalinas acelerem a hidrolise da fase de ligação.

3 – Deslocação de tempo de retenção

Equilíbrio insuficiente: pelo menos 10 a 20 vezes o equilíbrio do volume da coluna após a fase de fluxo de substituição.

Colapso hidrofóbico: a operação a longo prazo da coluna C18 com a fase aquática levará à contração dos poros e requer a injeção de 5% de recuperação da fase orgânica.

Estratégia de manutenção preventiva

1. Normalizar o processo operacional

- Evite mudanças abruptas de pressão, válvula de interrupção deve ser lenta.

- A mudança de fase de fluxo requer uma transição gradiental, proibindo a mudança direta da fase orgânica para a fase aquática pura.

Limpeza profunda regular

- Lavagem regular: lavar com 95% de água - 5% de metanol → metanol puro → isopropanol, pelo menos 10 vezes o volume da coluna de cada solvente

Poluentes obstinados: os resíduos de proteína são escolhidos com DMSO e o amido é lavado com água.

Otimização das condições de armazenamento

- Quando não é usado por muito tempo, a memória da coluna está cheia de metanol ou acetonitril, apertando a junção para evitar a secagem [^2^]. É proibido manter o tampão durante a noite.

A resolução de falhas da coluna de cromatografia inversa requer uma combinação de lavagem física, regeneração química e especificações operacionais. Priorizar a eliminação de fatores não derivados da coluna (como obstrução do instrumento) e, em seguida, abordar o problema da própria coluna cromatográfica. Criar um registro completo de manutenção que registre as condições de cada lavagem, as mudanças de pressão e os resultados dos testes prolonga significativamente a vida útil da coluna.