O detector de fluorescência cromatográfica líquida (FLD) é um detector de alta sensibilidade e alta seletividade para compostos que produzem fluorescência ou substâncias que emitem luz após a derivação. Sua principal vantagem é que a sensibilidade é muitas vezes maior do que o detector UV e é resistente a interferências.
O mecanismo de trabalho do detector de fluorescência é baseado no fenômeno fotogênico, as etapas principais são as seguintes:
A luz excitada é irradiada por uma fonte de luz (lâmpada de xenão, lâmpada de mercúrio ou diodo laser comumente usada) que emite uma luz excitada de comprimento de onda específico e filtra um único feixe de excitação de comprimento de onda através de um monocromático (raster ou filtro) focado no fluxo da coluna cromatográfica (piscina de detecção). Quando a molécula do componente a ser testado absorve a energia da luz excitada, ela passa do estado básico (estado estável) para o estado excitado (estado de alta energia).
Emissão de fluorescência em estado de excitação moléculas instáveis, em um curto período de tempo (10-8 ~ 10-4 segundos) através de salto não-radiação perda de parte da energia, de volta ao estado de excitação * baixo nível de energia vibracional, e depois através de salto de radiação liberar fótons, de volta ao estado básico, este processo produz luz é fluorescência. O comprimento de onda da fluorescência é sempre maior do que o comprimento de onda da luz de excitação (deslocamento de Stokes), uma característica essencial da detecção de fluorescência.
Captura e conversão de sinais Para evitar a interferência da luz excitada, o sistema de recepção de fluorescência do detector (PMT fotomultiplicador ou diodo fotoelétrico) é geralmente colocado em ângulo de 90° com a via óptica excitada. A fluorescência emitida é recebida pelo detector fotoelétrico e convertida em sinal elétrico após a filtragem de comprimentos de onda de fluorescência característicos pelo monocromático. A intensidade do sinal elétrico e a concentração do componente a ser testado são lineares dentro de um certo intervalo, após amplificação e processamento de dados, para obter picos cromatográficos e resultados quantitativos.
Processo de teste:
Uma fonte de luz excitada, como uma lâmpada de xenon ou um laser, emite um espectro contínuo e, após a espectroscopia do monocromático, seleciona um comprimento de onda específico como luz excitada.
A luz estimulada irradia a substância fluorescente na piscina da amostra para produzir fluorescência.
Os sinais fluorescentes são detectados por componentes fotosensíveis, como tubos fotomultiplicadores, através de um caminho óptico em ângulo reto (evitando interferências de luz excitadas) e convertidos em sinais elétricos.
O sinal elétrico é amplificado e transmitido para o sistema de processamento de dados para gerar um cromatograma.
Os detectores de fluorescência de cromatografia líquida, com sua alta sensibilidade e alta seletividade, tornam-se ferramentas importantes para a análise de traços, especialmente em áreas como a biologia e o ambiente. No entanto, sua não versatilidade e sensibilidade à interferência limitam o escopo de aplicação. Suas capacidades analíticas podem ser ampliadas ainda mais para atender às necessidades complexas de detecção de amostras, combinando fontes de luz laser, tecnologias conjuntas ou métodos de derivação.