Os contadores de algas são ferramentas-chave em áreas como monitoramento ecológico aquático, avaliação ambiental e aquicultura, e suas normas operacionais afetam diretamente a precisão e confiabilidade dos dados. Abaixo, os quatro principais aspectos da preparação da amostra, depuração do instrumento, contagem de observação e tratamento dos resultados, detalhem os detalhes do uso.
Coleta de amostras e pré-tratamento: base de dados
As amostras devem ser representativas, a coleta deve evitar os flutuantes da superfície da água e os sedimentos do fundo, usando o método de amostragem estratificada vertical (por exemplo, superfície, camada média, fundo) misturado uniformemente. Para análise quantitativa, o volume de amostragem (por exemplo, 1L) deve ser gravado sincronicamente. Para amostras de água com maior quantidade de partículas em suspensão, as grandes impurezas devem ser removidas por pré-filtração com uma membrana de filtro de 30-50 μm de abertura, mas cuidados devem ser tomados para evitar a perda de algas alvo por filtração excessiva. Para distinguir entre as algas vivas e mortas, a concentração final de 0,1% de líquido de coloração vermelha neutra pode ser adicionada, e as células vivas são tingidas de vermelho. O tempo de conservação da amostra não deve exceder 24 horas e a conservação à baixa temperatura (4 ° C) pode retardar a mudança morfológica das algas.
Equipamento do instrumento: correspondência precisa das condições de observação
Preaqueça por 10 a 15 minutos para garantir a estabilidade da fonte de luz. De acordo com a densidade das algas selecionando uma piscina de contagem adequada (por exemplo, caixa de contagem do plancton), as amostras de alta abundância devem ser diluídas para o número de células no campo de visão ≤ 100 / campo de visão. Ajuste o múltiplo do objetivo (comumente usado 10x ou 40x) para manter a imagem celular claramente focada com o botão de foco grosso / fino. Definir a intensidade de luz adequada - algumas algas (como algas azuis) são sensíveis à luz intensa e precisam reduzir o brilho da fonte de luz para evitar mudanças morfológicas causadas por danos luminosos; Grupos com estruturas de tatuagem, como as silícias, precisam de uma forte transmissão de luz para destacar as características da casca. Se o instrumento estiver equipado com varredura automática, a velocidade de varredura e a resolução da imagem devem ser calibradas com antecedência para evitar vazamentos ou contagens duplicadas.
Observação e contagem: desvios operacionais padronizados
Utilize o caminho de letra "de" por toda a sala de contagem para evitar a perda de áreas de borda. As células sobrepostas devem ser contadas por separação focal ajustada para uma camada única e, se não puderem ser diferenciadas, por metade. Para grupos em cadeia (como microcistas) ou grupos gelatinosos (como fibrillas), a contagem global e o registro do tamanho do grupo são necessários. Quando se encontra com espécies difíceis de identificar, é possível tirar uma comparação de retenção de microfotografias. Recomenda-se contar pelo menos duas amostras paralelas por amostra, tomando a média para reduzir os erros aleatórios. Se o coeficiente de variação da contagem é superior a 15%, é necessário aumentar o número de repetições para mais de 5.
Cálculo de resultados e controle de qualidade
Os dados brutos são calculados de acordo com a fórmula "densidade celular = valor de contagem × múltiplo de diluição / volume de amostragem". É necessário prestar especial atenção à conversão de unidades (por exemplo, células/L). Estabelecer um sistema de controle de qualidade: ① controle vazio (água estéril) para verificar a poluição do reagente; ② precisão do método de validação experimental de recuperação de marcação; Calibre regularmente a área do campo de visão com solução de partículas padrão. Os registros de dados devem conter parâmetros ambientais como o tempo, o local, a temperatura da água e o pH da amostragem para facilitar a análise de relevância posterior.
Manutenção e manutenção: prolongar a vida útil do equipamento
Limpe oportunamente os resíduos da piscina de contagem após cada uso, lavando com água destilada e desinfetando com 75% de etanol. A lente do objetivo só pode ser limpa unidirecionalmente com papel de limpeza mergulhando uma pequena quantidade de mistura de álcool. O cabo de alimentação deve ser retirado quando não for usado por muito tempo e a tampa à prova de poeira deve ser armazenada em um ambiente seco. Verifique regularmente a vida útil da lâmpada da fonte de luz e substitua-a oportunamente para garantir a estabilidade da intensidade da luz. Os componentes eletrônicos evitam o contato com líquidos corrosivos e, em caso de falha, devem entrar em contato com profissionais de manutenção.