A limpeza da coluna de cromatografia capilar deve combinar o tipo de poluição, as propriedades de fase fixa e as especificações operacionais. O processo de limpeza e as precauções são detalhadas a seguir em múltiplas dimensões:
Métodos básicos de limpeza
- Lavagem com solvente
- Cenários de aplicação: poluentes orgânicos não polares ou polares médios (por exemplo, gorduras, solventes residuais).
- Pontos operacionais:
- Escolha do solvente: metanol, acetona ou hexano são preferidos e, se necessário, diclorometano (uso cauteloso de solventes clorados).
- Método de lavagem: injetar a quantidade apropriada de solvente através de uma seringa de trace, com base na gravidade ou no gás de baixa pressão para impulsionar o fluxo de solvente através da coluna cromatográfica, repetindo várias vezes até que o poluente se dissolva.
- Contra-indicações: colunas cromatográficas de fase fixa não ligadas / cruzadas desativam este método para evitar a perda de fase fixa.
- Envelhecimento a alta temperatura
- Cenário de aplicação: compostos de alto ponto de ebulição (por exemplo, polímeros, resíduos obstinados).
- Pontos operacionais:
- Configuração de temperatura: Temperatura máxima de uso abaixo da coluna cromatográfica 10-20 ° C, durante 2-8 horas.
Velocidade de fluxo de gás: mantenha uma baixa velocidade de fluxo de 2-5 mL/min para facilitar a eliminação de voláteis.
- Nota: Se a linha de base permanecer instável após o envelhecimento, deve ser tratada em combinação com outros métodos.
- Método de corte de cabeça de coluna
- Cenários aplicáveis: poluição física (por exemplo, depósito preto na abertura da amostra) ou outros métodos inválidos.
- Pontos importantes de operação: remover a cabeça da coluna poluida 1-5 cm, a corte deve ser aplanada para evitar afetar o efeito da coluna.
Programa de Tratamento de Poluição Profunda
Contaminação de proteínas/amostras biológicas
- Agente de limpeza: 0,1% de ácido trifluoroacetico + 20% isopropanol mistura de solução.
- Passo: lavagem a baixa velocidade de fluxo, transição gradual para a fase orgânica de alta proporção.
- amortecedor de sal/depósito de íons metálicos
- Agente de limpeza: 5% solução de metanol em água (desativar lavagem direta com água pura!).
- Ponto-chave: a velocidade de fluxo é controlada abaixo de 0,3 mL / min para evitar que a precipitação de sal aumente o bloqueio.
- Acúmulo de substâncias lipídicas/hidrofóbicas
- Agente de limpeza: tetrahidrofurano (THF), cloroformo e outros solventes fortes, posteriormente, o sistema de retorno deve ser substituído.
Especificações operacionais e controle de riscos
- Desmontagem e instalação: depois de cortar a fonte de ar, retire a porca de entrada da amostra, o anel de vedação e o segmento antigo da coluna. A instalação da nova coluna requer um controle preciso da profundidade da entrada da amostra.
- Monitoramento de pressão: monitoramento em tempo real da pressão do sistema durante o processo de limpeza, aumento anormal imediatamente para a bomba para verificar o estado do filtro em linha.
Pureza do solvente: Use reagentes cromatográficos para evitar a introdução de novas impurezas.
A limpeza da coluna de cromatografia capilar deve seguir o princípio da "medicação subsymptomática", combinando vários meios como limpeza física, dissolução química e volatilidade termodinâmica. A manutenção preventiva diária pode reduzir significativamente a frequência de limpeza em profundidade, enquanto que, em caso de poluição complexa, é recomendado criar um arquivo de uso de colunas cromatográficas que registre os parâmetros e as mudanças de desempenho de cada limpeza e forneça suporte de dados para a manutenção precisa.