Primeiro passo:Sintetizador de péptidosPreparação pré-operacional – estabelecer as bases para o sucesso

Inspeção ambiental e de equipamentos

Escolha um local seco, limpo e com temperatura estável (20°C ± 5°C) para evitar a umidade, a alta temperatura ou a interferência da poeira.

Certifique-se de que a instalação do instrumento é suave e que a tensão de alimentação, a frequência e os requisitos do equipamento correspondem (por exemplo, o medidor de pressão de ar comprimido "AIR" precisa de 60-100psi e o medidor "N₂" precisa de 5-10psi).

Verifique se a garrafa de armazenamento de solventes e a conexão da tubulação de gás estão fechadas para evitar vazamentos.

Preparação de materiais e reagentes

Prepare aminoácidos de alta pureza, reagentes ativantes (como HBTU), solventes (DMF, DCM) e resinas para garantir que não haja impurezas.

O reagente é pesado de acordo com o esquema de síntese e misturado estritamente proporcionalmente (por exemplo, 3 vezes o excesso de aminoácidos para a reação de acoplamento).

A resina é adicionada ao reator, secada com DCM e depois lavada com DMF para remover as impurezas.

Configuração de parâmetros e calibração

Introduza a sequência de polipéptidos e defina as condições de reação (temperatura, tempo, proporção de solvente).

Exemplo: Fmoc desprotecção (20% de pepidina / DMF, 5 minutos x 2 vezes); Reação acoplada (3 vezes o excesso de aminoácidos, 1 hora).

Execute o processo de auto-inspeção do equipamento para calibrar os parâmetros de temperatura, pressão, agulha de extração de líquido e outros para garantir a precisão do sensor.

2ª etapa: Operação do processo de síntese - análise das etapas principais

Iniciar o programa de síntese

Abra a fonte de alimentação do sintetizador e o interruptor de ar comprimido para iniciar o programa predefinido.

O instrumento completa automaticamente a desproteção (como a remoção do grupo Fmoc), a acoplamento (reticulação de aminoácidos), o ciclo de lavagem e monitora a temperatura de reação, a pressão e o pH durante todo o período.

Principais pontos operacionais

Desproteção: remover os grupos aminoprotetores com um solvente alcalino, como 20% de pepidina / DMF, repetir 2 vezes para garantir que seja completo.

Reação acoplada: injete a solução de aminoácidos ativada na câmara de reação, suplemente o DMF à concentração apropriada e agite por 1 hora para formar ligações peptídicas.

Lavagem: Limpe com DMF após cada etapa da reação para remover substâncias não reagidas e subprodutos e reduzir a acumulação de impurezas.

Monitoramento e ajuste em tempo real

Monitore o processo de reação por meio de análise de absorção UV ou espectroscopia de massa para garantir que cada passo seja realizado como esperado.

Se o líquido de reação for encontrado desigual, ajuste a velocidade do agitador; Se a temperatura for anormal, verifique a posição do disco de aquecimento.

3º passo: Tratamento e manutenção pós-síntese - estabilidade a longo prazo

Coleta e purificação de produtos

Adicione o lito (por exemplo, TFA / água / triisopropilsilano = 95: 2,5: 2,5) e agite a temperatura ambiente por 2 horas para separar o polipéptido da resina.

Filtrar para remover a resina, concentrar o lítio e precipitar o péptido bruto com éter, obtendo o produto sólido por centrifugação e lavagem.

Purificação por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para remover impurezas e obter polipéptidos de alta pureza (> 95%).

　　Sintetizador de péptidosLimpeza e manutenção de equipamentos

Limpeza imediata: após a síntese, limpe os recipientes de reação, agulhas, cabeças de bomba e tubulações imediatamente com etanol ou água deionizada para evitar a corrosão do equipamento por resíduos de reagentes.

Manutenção regular: substituição mensal de peças de desgaste (como anéis de vedação, agulhas) para calibrar a precisão do sensor; Lubrificação trimestral de partes de máquinas para manter o funcionamento suave.

Armazenamento a longo prazo: se o equipamento estiver ocioso, limpe-o e desmonte-o em um lugar seco e ventilado para evitar a oxidação ou a umidade.

Resolução de problemas e registro

Perguntas frequentes: vazamento da cabeça da bomba (substituição do anel de vedação), temperatura excessiva do recipiente de reação (ajuste da posição do disco de aquecimento), incapacidade de ligar o equipamento (verificação da fonte de alimentação e da placa de controle).

Registro e relatório: registro detalhado dos parâmetros operacionais de cada etapa (dose de reagente, tempo de reação, temperatura) e pureza do produto, gerando relatórios experimentais para fornecer a base para a otimização posterior.