Um,Wyatt dispersor de luz laser de múltiplos ângulosPreparação antes do teste

Preparação do solvente

Sistema aquático: Use água ultrapura ou solução salina de preparação (cerca de 1 L), adicione 0,02% de antimicrobiano NaN3 e filtre com uma membrana de filtro de 0,22 μm.

Sistema de fase orgânica: usando solvente de grau HPLC, também filtrado com membrana de filtro de 0,22 μm (o reagente importado é tratado de acordo com a situação real).

Preparação da amostra

Concentração de preparação de acordo com a faixa de peso molecular (anel quantificador de 100 μL):

Peso molecular ~ 1000kDa: 0,5-1mg / mL

Peso Molecular ~ 100kDa: 1-2mg / mL

Peso Molecular ~ 10kDa: 3-5mg / mL

Peso Molecular ~ 5kDa: 5-10mg / mL

As amostras devem ser filtradas com uma membrana de filtro de 0,22 μm ou 0,45 μm, ou remover as impurezas por meio de tratamento centrífugo, usando a combinação de fluxo sempre que possível.

Inspeção de instrumentos

Certifique-se de que o cabo de alimentação, o interruptor de alimentação e o interruptor (para conexões de sinal com cabo de rede) estejam ligados.

Iniciação e equilíbrio do instrumento

Ordem de inicialização

Abra a bomba, a caixa de temperatura da coluna (temperatura de ajuste), o sistema de amostragem (amostragem manual/automática), o detector diferencial ou ultravioleta, o detector de viscosidade, a fonte de alimentação do detector de dispersão de luz laser multiângulo e o computador.

Limpeza e equilíbrio do sistema

Abra a bomba, esfregue o sistema com água ultrapura por cerca de 5 minutos (bomba de purga) e feche a válvula de purga.

Utilize o sistema de lavagem de fase de fluxo mais recente (o sistema orgânico usa a fase de fluxo diretamente).

Ajuste a velocidade de fluxo para 0,1 mL/min (se o detector de viscosidade estiver conectado, a bomba deve ser ligada após entrar na interface de trabalho e o IP & DP está em purge on).

Se a coluna GPC/SEC não estiver conectada ao sistema, a velocidade de fluxo pode ser ajustada diretamente para 0,1-1,0mL/min (sem detector de viscosidade, a válvula de purga do detector diferencial deve estar no estado de "Purge On").

Se a coluna GPC / SEC estiver conectada ao sistema, a velocidade de fluxo inicial deve ser de 0,1 mL / min, aumentando 0,1 mL a cada 1-2 minutos e ajustando a velocidade de fluxo para 0,4-0,5 mL / min para equilibrar completamente o sistema.

Tempo de equilíbrio: o sistema de fase aquática recomenda lavagem e equilíbrio um dia antes e início do teste no dia seguinte; O tempo de equilíbrio do sistema de fase orgânica é geralmente de 3 a 12 horas.

Operações de teste e coleta de dados

Equilibrio do sistema e estabilidade de base

Depois que o sistema for totalmente equilibrado, ajuste gradualmente a velocidade de fluxo para a velocidade de fluxo de teste.

Ajuste a válvula de purga do detector de variação para o estado "Purge Off" e retorne a zero quando o sinal estiver estável.

O método de operação do viscómetro (Visco Star) está disponível no anexo, enquanto a linha de base está estável.

Chamar modelo de teste

Chamar o modelo de teste correspondente no software Astra (é recomendado usar o modelo/método criado pelo engenheiro de instalação).

Faça uma amostra única: Arquivo → Novo → Experimento a partir de Modelo/Método → Meus Modelos/Métodos, selecione o modelo de experimentação correspondente.

Sequência de amostragem automática: File → New → sample set Template/blank sequence → My Templates/method, selecione o modelo de teste correspondente.

Amostragem e coleta de dados

Vire a válvula de amostragem do estado "load" para o estado "inject" e faça a amostragem através do sistema de amostragem.

O software Astra inicia a coleta de dados automaticamente e, quando a coleta de dados é concluída, o software pára, de acordo com o horário definido, ou pára manualmente (Experimento → Parar).

Salvação de dados

Após a coleta de dados, clique em Arquivo → Salvar como..., nomee o arquivo e salve.

Quatro.Wyatt dispersor de luz laser de múltiplos ângulosProcessamento de dados e visualização de relatórios

Processo de processamento de dados

Ajuste da linha de base: clique duas vezes em Baseline, marque LS 11 (ângulo de 90°), ajuste o ponto final da linha de base para garantir o nível da linha de base, clique em OK / Aplicar para salvar.

Fixe o pico: Mova o mouse para o ponto de início do pico, mantenha pressionado o botão esquerdo para arrastar para o ponto de queda do pico, solte o botão esquerdo para definir a área do pico, ajuste a borda da área do pico, clique em OK / Aplicar para salvar.

Entrada e normalização de valores dn/dc: Digite o valor dn/dc e selecione normalizar (não é necessário repetir a operação se uma amostra padrão <50kDa, como BSA, dextran, já foi normalizada no modelo).

Ver relatório: depois de concluir as etapas acima, veja o relatório para obter os resultados do teste.

Correção do instrumento (realizada regularmente)

Correção de volume de atraso: a correção do volume das tubulações entre os detectores para garantir o alinhamento da ponta do pico é geralmente realizada pelo engenheiro de instalação e os resultados são salvos no modelo do software Astra.

Correção de sinal angular de 90° (correção de tolfeno): obtenha o coeficiente de correção do valor de intensidade de luz dispersa angular de 90° e do valor de tensão, recomendado anualmente ou semestralmente.

Correção de normalização de 18 ângulos: Calibrar outros 17 detectores com um ângulo de 90 °, usando um produto padrão de Rg < 10nm, como Dextran de 30 kDa ou BSA de soro bovino.