O triturador de células por ultra-som é um dispositivo experimental comumente usado, principalmente para a quebra de células, fissura, quebra de tecidos, extração de DNA / RNA, extração de proteínas e outras operações. Seu princípio de funcionamento é que as ondas mecânicas de alta frequência geradas pela vibração ultrasônica causam a ruptura física de células ou tecidos. Abaixo estão os métodos de utilização do triturador de células de ultra-som, incluindo a preparação do equipamento, passos de operação e precauções:
1. Preparação do equipamento
Verifique o equipamento: antes de usar, verifique o estado de funcionamento do triturador de células por ultra-som para garantir que o equipamento funcione corretamente. Verifique se o cabo de alimentação, a sonda de ultra-som e o sistema de resfriamento (se houver) estão intactos.
Limpeza da sonda: Limpe a sonda para evitar que os poluentes do experimento anterior afetem os resultados do experimento seguinte. A sonda pode ser limpa com etanol sem água.
Preparação de amostras: As amostras prontas para o tratamento geralmente requerem mistura com a quantidade apropriada de lisante, como tampão PBS, para garantir que as amostras sejam uniformemente dispersas durante o tratamento por ultra-som.
2. Definição de parâmetros
Escolha a frequência apropriada: os trituradores de células de ultra-som geralmente têm diferentes opções de frequência. Em geral, as frequências comuns são 20kHz, 25kHz, etc. A escolha da frequência deve considerar a natureza da amostra e o propósito experimental.
Configurar potência e tempo: Configure a potência e o tempo apropriados de acordo com a natureza da amostra. Normalmente, a potência é ajustada entre 30% e 80% e o tempo varia de 5 segundos a 2 minutos. Recomenda-se começar com baixa potência e curto tempo para evitar quebrar excessivamente.
Potência excessiva: pode causar excesso de aquecimento da amostra ou espuma.
Tempo longo demais: pode levar à acumulação excessiva de calorias, o que pode afetar a atividade de proteínas e enzimas dentro da célula.
Definir o modo de trabalho intermitente: geralmente, a operação intermitente é usada para evitar o sobreaquecimento da amostra, especialmente quando trabalha com alta potência. As configurações comuns são: 5 segundos para trabalhar e 5 segundos para parar.
3. Passos operacionais
Conecte a sonda: Conecte a sonda de ultra-som firmemente ao gerador de ultra-som da trituradora de células de ultra-som. Certifique-se de que a conexão entre a sonda e o instrumento seja firme.
Coloque a amostra: Coloque a amostra a ser tratada em um recipiente adequado. Os recipientes comuns são tubos de policarbonato transparentes ou copos pequenos, o tamanho do recipiente deve corresponder ao tamanho da sonda.
Inicie o sistema de resfriamento (se houver): Alguns trituradores de células por ultra-som precisam de resfriamento a água ou refrigerante circulante para evitar o sobreaquecimento. De acordo com as instruções do equipamento, certifique-se de que o sistema de resfriamento está funcionando corretamente.
Iniciar o dispositivo: após pressionar o botão Iniciar, o dispositivo começa a funcionar. Observe o estado de funcionamento do dispositivo para garantir que não haja ruído ou vibração anormais.
Aumente gradualmente a potência e o tempo: comece com uma potência mais baixa e ajuste gradualmente para a potência e o tempo apropriados. Após cada processamento por algum tempo, suspenda o equipamento para verificar o grau de quebra da amostra.
Operação intermitente: se a amostra for muito quente ou produzir bolhas durante a operação, pause o tratamento por ultra-som e deixe a amostra resfriar.
Terminar o tratamento: quando a amostra atingir o grau de quebra desejado, pare o tratamento por ultra-som.
4. Coleta de amostras
Parar o dispositivo: Pressione o botão para desligar o dispositivo depois que o triturador de células de ultra-som concluir o processamento.
Limpeza da sonda: após a extração da sonda, use etanol sem água ou um solvente apropriado para limpar a sonda de ultra-som.
Extração de amostras: extrair as amostras do recipiente para análise ou tratamento posterior.
Limpeza e manutenção
Limpeza do equipamento: Limpe o equipamento, especialmente as sondas e os recipientes, após cada experimento para evitar que os resíduos da amostra afetem o desempenho do equipamento ou poluem as amostras de seguimento.
Manutenção regular: verifique regularmente os cabos, sondas, sistemas de refrigeração, etc. do equipamento para manter o bom estado de trabalho do equipamento. Se necessário, substitua a sonda de ultra-som ou limpe o sistema de refrigeração.
6. Atenção
Evite o sobreaquecimento: o esmagamento por ultra-som pode causar sobreaquecimento de amostras, especialmente com alta potência e processamento prolongado. O modo de trabalho intermitente é recomendado e a temperatura da amostra é verificada regularmente durante o processamento.
Evite a poluição cruzada: para amostras diferentes, sondas diferentes devem ser usadas ou limpas para evitar a poluição cruzada.
Proteção da audição: o triturador de células ultra-sônicas produz ruído maior quando funciona, portanto, você deve usar tampões ou tampões durante a operação para proteger a audição.
Evitar a formação de bolhas: Evite a geração de excesso de bolhas durante a operação, o que pode afetar o efeito de esmagamento. Pode ser escolhida uma potência mais baixa ou intervalos mais longos.