Os macrófagos têm origem em células mononucleares no sangue, que deixam a circulação sanguínea e se diferenciam em diferentes tecidos. Os macrófagos estão envolvidos na detecção e ingestão de bactérias e células danificadas. Além disso, os macrófagos provocam inflamação ao liberar citocinas que ativam as células vasculares, promovendo a adesão das citocinas aos vasos sanguíneos e a migração para o tecido. Células diferenciadas de THP-1 têm sido amplamente usadas em modelos de macrófagos in vitro para estudar a participação de macrófagos em respostas inflamatórias. A linha de células mononucleosas humanas THP-1 pode ser diferenciada em macrofagos por meio do éster de 13-acetato de 12-tetracetado de fosbolol (PMA) e ativada por LPS. As células ativadas THP-1 mudam de morfologia e secretam citocinas inflamatórias. O monitoramento dos níveis de expressão das citocinas é um indicador fisiológico importante para modelos de células inflamatórias. Apresentamos os resultados da análise celular multiparâmetro, usando imagem fenotípica para examinar a formação de macrófagos e ELISA de baixo volume para analisar a secreção de citoquinas para avaliar o impacto dos compostos farmacológicos na resposta inflamatória. PMA e LPS estimulam as células THP-1 por 48 horas. Quando PMA e LPS ativaram as células THP-1, IL-8, IL-1b e TNF-a aumentaram. Para avaliar os compostos anti-inflamatórios, as células foram tratadas com os inibidores de quinase SB202190 e PDTC e o antibiótico mosisacina, respectivamente, antes da ativação. Em seguida, o efeito inibitor desses compostos anti-inflamatórios na resposta inflamatória foi medido quantificando a secreção de citoquinas. Os efeitos da formação de macrófagos foram observados usando imagens fenotípicas. De acordo com o mecanismo de ação relatado, a expressão de citocinas dos compostos SB202190, PDTC e Mosisacina diminuiu de acordo com a concentração.