Nos últimos anos, houve um grande avanço na tecnologia de agregados de células tumorais in vitro como modelos de ambientes de tecidos em vivo. Esta técnica permite que as células separadas cultivadas em placas de fundo redondo de baixa adsorção se agrupem em esferas. Acredita-se que as esferas são capazes de simular o comportamento tumoral de forma mais eficaz do que as culturas celulares 2D convencionais. Porque, semelhante às entidades tumorais, as esferas celulares 3D também contêm células expostas na esfera e células profundamente enterradas dentro da esfera, ambas contendo células proliferantes e não proliferantes, e o centro da esfera é um ambiente hipoxigénico. Um número crescente de casos tem usado com sucesso este modelo de esfera tridimensional para triagem de compostos para uma variedade de usos para estudar tratamentos potenciais para o câncer. No entanto, é desafiador obter uma abordagem confiável para este tipo de análise de esferas 3D: a esfera inteira pode ser vista com foco em um campo de visão para obter imagens em lote de cada buraco. Otimizar os compostos e o tratamento de coloração para garantir o efeito de penetração dos corantes e evitar interferir com a posição da esfera. Obtenha imagens representativas em toda a estrutura 3D para minimizar o desfoco e o sinal de fundo no plano de imagem. Análise rápida de imagens para obter resultados significativos a partir dos quais conclusões experimentais podem ser tiradas.