Preparação antes da regeneração
Coluna de cromatografia ultralíquidaPreparação com reagentes: preparação de solventes cromatográficos de água ultrapura, metanol, acetonitril, isopropanol e outros, bem como garrafas de coleta de resíduos adequadas; Certifique-se de que o corpo da bomba e a válvula de amostragem não tenham vazamentos.
Inspeção da coluna cromatográfica: registro da coluna cromatográfica atual antes da regeneração, dados de pico, se houver fortes resíduos de poluentes na coluna, primeiro avaliar se a coluna cromatográfica tem valor regenerativo.
Operação segura: usar luvas, óculos de proteção durante a operação, para evitar o contato com a pele dos solventes orgânicos; Garantir que o laboratório seja bem ventilado.
Etapa de regeneração geral (principalmente coluna cromatográfica de fase inversa)
Resíduos de fluxo de lavagem
Remova a coluna cromatográfica e enxague com água ultrapura a uma baixa velocidade de fluxo (0,2-0,3 mL/min) durante 30-60 minutos para remover impurezas solúveis em água, como o sal tampão, evitando que o sal caia para bloquear o preenchimento.
Se o par de íons estiver na fase de fluxo, é necessário lavar com uma solução de metanol 50% por 1 a 2 horas antes de mudar para metanol puro.
Remoção de poluentes hidrofóbicos fortes
Enxague a coluna cromatográfica com 100% metanol e 100% acetonitril, mantendo a velocidade de fluxo de 0,3-0,5 mL/min, com um volume de lavagem de 20-30 vezes o volume da coluna por solvente.
Se o poluente for persistente, pode ser lavado com isopropanol opcionalmente (note a alta viscosidade do isopropanol, a velocidade de fluxo deve ser reduzida para evitar a pressão excessiva da coluna), depois de lavar com metanol.
Limpeza de poluentes polares
Para colunas cromatográficas com impurezas polares, lavar com uma mistura metanol-água (1:1) por 60 minutos e depois lavar com metanol puro até a linha de base suave.
Equilíbrio após a regeneração
Equilibre a coluna cromatográfica com a fase de fluxo do método de análise alvo, com um volume de equilíbrio não inferior a 10 vezes o volume da coluna, até que a amostra seja analisada após a estabilização da linha de base.
III. Tipos especiais de precauções de regeneração de colunas cromatográficas
Coluna de cromatografia de fase: desativar a lavagem com solvente aquático, lavar com hexano, diclorometano, éster de acetato etílico durante a regeneração, e finalmente manter o equilíbrio com hexano.
Colunas de cromatografia de troca iônica: lavar primeiro com uma solução tampão correspondente ao pH, depois lavar até neutro com água deionizada e finalmente conservar com um tampão contendo metanol de 5%.
Colunas de cromatografia manual: Use o solvente regenerativo recomendado pelo fabricante como prioridade, evite o uso de solventes polares fortes para evitar a destruição da fase de fixação manual.
Verificação e conservação pós-regeneração
Verificação de desempenho:Coluna de cromatografia ultralíquidaApós a conclusão da regeneração, a injeção de produtos padrão para testar o efeito da coluna, a simetria do pico, se a forma do pico melhorar, o efeito da coluna retornar ao nível original de mais de 80%, indica o sucesso da regeneração.
Conservação a longo prazo: coluna de cromatografia de fase inversa é preservada com selagem de metanol puro, coluna de cromatografia de fase estática é preservada com hexano positivo, as duas extremidades apertam a cabeça e são colocadas em ambiente de temperatura normal e proteção contra a luz.