Coluna de cromatografia capilarVários problemas podem ocorrer durante o uso, que podem afetar o efeito de separação, a precisão da análise e até a vida útil da coluna cromatográfica. Aqui está:Coluna de cromatografia capilarResumo detalhado das questões frequentes e suas soluções:
A redução do efeito da coluna
Descrição do problema: A capacidade de separação das colunas cromatográficas é reduzida, o que se manifesta como alargamento do pico, diminuição da resolução ou diminuição do número de torres teóricas.
Possíveis razões:
Perda de fase fixa: a alta temperatura ou a forte ação do solvente resulta na perda do revestimento de fase fixa.
Poluição da coluna: impurezas ou resíduos de pré-tratamento na amostra se acumulam dentro da coluna.
Envelhecimento insuficiente da coluna: a nova coluna não envelhece adequadamente e o solvente residual ou o baixo teor de polímeros afetam a separação.
Danos mecânicos: dobramento do cilindro, desligamento do chapéu ou bloqueio da tela.
Solução:
Envelhecimento regular: as colunas novas ou não usadas há muito tempo devem envelhecer por várias horas abaixo da temperatura máxima de uso de 20-30 ° C.
Evite altas temperaturas: controle rigoroso da temperatura da coluna para evitar exceder a temperatura máxima tolerada da fase fixa.
Limpeza de amostras: remover partículas e impurezas de amostras usando métodos como extração de fase sólida, filtragem ou centrifugação.
Troca de tela: se a tela estiver bloqueada, será necessário substituir uma nova tela e reinstalar o pilar.
II. Anormalidade do pico
Descrição do problema: picos asimétricos (arrastados ou esticados), picos de divisão ou picos fantasmas.
Possíveis razões:
Amostragem excessiva: exceder a capacidade da coluna resulta em expansão do pico.
Técnica de amostragem inadequada: quando a amostragem de desvio é inadequada.
Poluição da coluna: a absorção de impurezas na superfície de fase fixa afeta a transmissão de massa.
Volume morto excessivo: volume morto no amostrador, detector ou tubulação de conexão.
Solução:
Otimizar o volume de amostragem: ajustar o volume de amostragem de acordo com a capacidade da coluna, geralmente na atualização nanométrica para a microatualização.
Tecnologia de amostragem melhorada: ajuste das proporções de desvio ou uso de padrões de amostragem sem desvio.
Limpeza da coluna cromatográfica: lavar a coluna cromatográfica com solventes (como metanol, hexano) para remover a poluição.
Verifique o volume morto: Certifique-se de que o introdutor de amostras, o detector e a tubulação de conexão não tenham vazamentos ou ângulos mortos.
Alterações no tempo de retenção
Descrição do problema: O tempo de retenção do mesmo composto é instável em lotes diferentes ou dentro do mesmo lote.
Possíveis razões:
Flutuação da temperatura da coluna: a instabilidade do sistema de controle de temperatura provoca mudanças no tempo de retenção.
Inestável velocidade de fluxo de gás: vazamento ou erro do medidor de fluxo.
Alterações nas propriedades de fase fixa, como envelhecimento ou poluição em fase fixa.
Diferenças no tratamento da amostra: Inconsistencia nas etapas de pré-tratamento leva a alterações na matriz da amostra.
Solução:
Estabilizar a temperatura da coluna: Use um sistema de controle de temperatura de alta precisão para garantir que a temperatura da coluna seja constante.
Verifique a via do ar: verifique regularmente as conexões da via do ar para substituir componentes envelhecidos ou danificados.
Envelhecimento regular: Evite o envelhecimento excessivo em fase fixa e use as condições recomendadas nas instruções.
Tratamento padronizado de amostras: assegure que as etapas pré-tratamento sejam consistentes e reduza o efeito da matriz.
IV. Fratura ou vazamento da coluna cromatográfica
Descrição do problema: ruptura da coluna cromatográfica, desligamento do chapéu ou vazamento na junção.
Possíveis razões:
Instalação incorreta: o cilindro é dobrado ou o chapéu não é apertado.
Tensão mecânica: o pilar é afetado por forças externas durante o transporte ou operação.
Fadiga do material: envelhecimento do material da coluna após uso prolongado.
Solução:
Instalação correta: Certifique-se de que o cilindro seja montado em linha reta, apertando o chapéu, mas sem esforço excessivo.
Evite forças externas: Leve e solte levemente durante o transporte e a operação para evitar a curvatura ou o impacto do cilindro.
Inspeções periódicas: verifique regularmente os pilares, chapéus e juntas para substituir os componentes envelhecidos em tempo útil.
Picos fantasmas e interferência de fundo
Descrição do problema: pico desconhecido ou aumento do ruído da linha de base no cromatograma.
Possíveis razões:
Contaminação da amostra: a amostra contém impurezas ou resíduos pré-tratados.
Contaminação da amostra: envelhecimento da agulha de amostra, do revestimento ou do compartimento.
Poluição do gás transportador: O gás transportador contém oxigênio, umidade ou impurezas de hidrocarbonetos.
Poluição do detector: envelhecimento do fio do detector ou poluição da fonte iónica.
Solução:
Limpeza de amostras: eliminação de impurezas por meio de métodos como extração de fase sólida, filtração ou centrifugação.
Limpeza do introdutor de amostras: substitua regularmente a agulha de introdução da amostra, o revestimento e o separador para limpar a abertura de introdução da amostra.
Purificação do gás transportador: Use gás transportador de alta pureza e instale um dispositivo de purificação do gás transportador.
Detectores de manutenção: limpar o detector regularmente e substituir os componentes envelhecidos.
6- Escolha incorreta da fase fixa
Descrição do problema: A separação é má e o tempo de retenção do composto alvo é irracional ou confluente.
Possíveis razões:
Incompatibilidade de polaridade de fase fixa: Incompatibilidade com as propriedades da amostra (por exemplo, análise de compostos polares em colunas não polares).
O comprimento da coluna ou o diâmetro interno não são adequados: o comprimento da coluna é muito curto ou o diâmetro interno é muito grande, o que resulta em separação insuficiente.
Escolha inadequada da espessura da película: a espessura da película é demasiado fina para levar a baixa capacidade da coluna, e a espessura da película é demasiado espessa para levar à largura do pico.
Solução:
A fase fixa é selecionada de acordo com as propriedades da amostra: a amostra não polar seleciona a coluna não polar (por exemplo, DB-5) e a amostra polar seleciona a coluna polar (por exemplo, DB-WAX).
Parâmetros otimizados da coluna: selecione o comprimento adequado da coluna (por exemplo, 15-60 m) e o diâmetro interno (por exemplo, 0,18-0,53 mm) de acordo com as necessidades de separação.
Ajuste da espessura da membrana: selecione a espessura da membrana adequada (por exemplo, 0,1-5 μm) de acordo com a concentração da amostra e o volume de amostra.
7 - A vida útil da coluna é reduzida
Descrição do problema: a coluna cromatográfica falhou prematuramente e precisa ser substituída com frequência.
Possíveis razões:
Condições de operação inadequadas: por exemplo, alta temperatura, alta velocidade de fluxo ou solventes fortes.
Poluição grave da amostra: não foi purificada adequadamente.
Manutenção insuficiente: não envelhecimento regular ou limpeza da coluna cromatográfica.
Solução:
Otimizar as condições de operação: controlar rigorosamente a temperatura da coluna, a velocidade de fluxo e o tipo de solvente.
Limpeza de amostras reforçada: eliminação de impurezas por meio de métodos como extração de fase sólida, filtração ou centrifugação.
Manutenção regular: envelhecimento, limpeza e armazenamento de acordo com as instruções.