Preparação do equipamento: Verifique se a conexão da fonte de alimentação da cama de agitação de CO2 e da fonte de gás (cilindro de aço de CO2) é normal para garantir que a pressão da válvula de redução de pressão de CO2 seja estável (geralmente 0,1 ~ 0,2 MPa). Ligue a fonte de alimentação do dispositivo, pré-aqueça até a temperatura definida (por exemplo, 37 ° C) e pré-aqueça o prato de água no recipiente para manter a umidade.

Configuração de parâmetros: definir a concentração de CO2 (normalmente 5%) de acordo com as necessidades celulares, calibrada por meio de sensores de infravermelho ou condução térmica; A faixa de temperatura definida é geralmente a temperatura ambiente até 50 ° C, o pré-aquecimento antecipado é necessário para evitar flutuações de temperatura; Ajuste a velocidade de rotação (50 ~ 300 rpm) e a amplitude (geralmente 5 ~ 50 mm) de acordo com o recipiente de cultura, para evitar a salpicadura do líquido; O prato de água adiciona água destilada estéril para manter ≥95% de umidade.

Posicionamento da amostra: o recipiente deve ser selado (por exemplo, usando uma tampa respiradora ou apertando a tampa da garrafa) para evitar a fuga de CO2 e a poluição; Coloque as amostras em equilíbrio para evitar que o desvio de gravidade afete a operação do agitador.

Monitoramento operacional: verificar regularmente a concentração de CO2, a temperatura estável e registrar os parâmetros operacionais; Quando se usa uma garrafa de cultivo ou uma garrafa selada com tampa respiradora, é necessário equilibrar a penetração de CO2.

Terminar a operação: desligar a fonte de CO2 e esperar que a concentração caia para 0% para evitar danos ao sensor; Limpe os pratos de água e as cavidades para evitar a proliferação de micróbios.

Guia das melhores práticas de cultura celular

Tipo de célula e seleção de meio: selecionar o meio adequado de acordo com o tipo de célula, como DMEM adequado para linhas celulares de proliferação rápida e MEM adequado para vários tipos de células; As células originais precisam de fatores de crescimento especiais.

Recuperação e congelamento celular: descongelar rápidamente as células durante a recuperação, reduzindo o dano ao cristal de gelo; Adicione um protetor de congelamento (por exemplo, 10% DMSO) durante o congelamento e transfera-o para o nitrogênio líquido depois de resfriar lentamente até -80 ° C.

Operação estéril: todas as operações são realizadas em uma mesa de trabalho ultra-limpa, usando roupas experimentais, luvas, máscaras e chapéus; Evite falar e tosse na área de operação, reduzindo o risco de transmissão de micróbios pelo ar.

Observação e registro regulares: observação regular do crescimento celular sob o microscópio, incluindo a morfologia celular, densidade de crescimento e poluição; Registre os dados relevantes para detectar e lidar com as anomalias em tempo útil.

Manutenção e calibração do equipamento: calibração regular do sensor de CO2 (a cada 6 meses) e substituição do filtro (se houver); Desligue a energia durante a limpeza para evitar que líquidos entrem no sistema de circuito.