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Uma carcaça de pesquisa de exossomas? Simple Western duplica a eficiência da detecção
Datas:2025-10-21Leia:0
exossomas (exossomas)São pequenas nanopartículas lipídicas derivadas do endoorganismo, com um diâmetro de cerca de 30-200 nanômetros, e a maioria das células vivas secreta ativamente exossomas através da excretação.[1]A liberação de exossomas pode ser contínua ou induzida, seja em estado patológico ou fisiológico, e o processo de liberação é dinâmico, controlável e funcionalmente relevante. A composição molecular e a quantidade de liberação dos exossomas dependem do estado das células de origem. Os exossomas podem ser isolados de várias linhagens celulares, culturas originais e extraídos de líquidos biológicos como soro, plasma e saliva. Dada a diversidade das fontes, os exossomas têm funções fisiológicas múltiplas e cada vez mais pesquisas sugerem que desempenham um papel importante em vários estados patológicos, como câncer, doenças infecciosas e doenças neurodegenerativas. Assim, os exossomas se tornam um objeto-chave de pesquisa nos métodos de biopsia líquida.[2]Além disso, os exossomas também podem ser modificados por engenharia para se tornarPotenciais transportadores de entrega de medicamentos[3]- É.
Devido ao pequeno volume dos exossomas, a separação dos exossomas de uma matriz biológica complexa é desafiadora e geralmente tem baixos rendimentos de separação.Neste contexto, Simple Western ™ Torne-se a técnica ideal para o estudo de exossomas: o método requer apenas 3 microlitros de amostras e, com sensibilidade de pico, reduz significativamente a exigência de um Western blot tradicional para o volume de exossomas desejado.Em seguida, eles podem ser caracterizados usando anticorpos de detecção específica de antígenos associados ao exossoma – que podem ser marcadores gerais do exossoma ou marcadores de propriedade de suas células de origem ou líquidos corporais. Neste esquema experimental, vamos usar os padrões ecrosómicos comercializados e anticorpos através da Simple Western. ™ Detectar marcadores genéricos e marcadores específicos de origem de exossomas.
Este artigo apresenta os resultados da validação da eficácia dos anticorpos na tabela abaixo com base em três critérios ecrónicos "plasma humano, soro humano e células A549 humanas (células de câncer de epiderâmio bascular pulmonar)":
01. Expressão de marcadores exossomáticos gerais
Flotillin-1: como marcador universal clássico, detectado em todos os três produtos padrão (Figura 1A).
Alix: expressa em todos os três padrões, mas é mais expressa em exossomas de origem celular A549 (Figura 1D).
02. Expressão de marcadores específicos de origem
Anexina V: como marcador de apoptose e anticoagulante, detectada em células A549, exossomas de origem plasmática, não detectada em exossomas de origem sérica (Figura 1B).
• EGFR (HER1): detectado apenas em exossomas de origem celular A549, sem sinal em soros ou exossomas de origem plasmática (Figura 1C).
Figura 1 Usando o Simple Western ™ Determinação do antígeno alvo do exossoma. A：flotillin-1； B：Annexin V； C：EGFR； D：Alix。
03. Marcadores para necessidades especiais de tratamento
CD63: O sinal que indica o efeito da modificação da glicosilasização na detecção desse marcador só foi detectado após o tratamento com o padrão exossômico com a PNGase F (desglicosilase) (Figura 2).
04. Verificação de outros marcadores
Os anticorpos restantes na Tabela 2 (por exemplo, Annexin A2, HSPA8/HSC70, TSG101, etc.) foram validados pelo Simple Western e podem ser detectados como sinais alvo nos padrões de exossomas correspondentes (Figura 2).
Figura 2. Visão da via natal de detecção de antígenos alvo em plasma e exossoma padrão de origem celular A549.
Valores essenciais da tecnologia Simple Western
1) Eficiência:Apenas 3-5 μL de lisote ecrósomo (WB tradicional requer 50 μL +) para adaptar amostras valiosas; Os capilares reduzem a perda de amostras durante todo o processo e são adequados para proteínas de membrana de baixa abundância.
(2) Alta sensibilidade: limite inferior de detecção de nível de pico, CD63 / Alix mensurável, etc., através do tratamento com PNGase F para quebrar a interferência de glicosilação, para alcançar a detecção específica como EGFR.
(3) interferência anti-matriz: 12-230kDa eletroferese capilar desmisturada, após a fissura do exossoma pode ser diretamente no aparelho, sem necessidade de purificação onerosa.
(4) Quantificação múltipla: amostra única mede sincronicamente oito alvos, em conformidade com o padrão MISEV, a faixa dinâmica cobre seis níveis de quantidade.
(5) Processo de automatização: resultados totalmente automatizados em 3 horas para reduzir a degradação das proteínas; Cada buraco é controlado de forma independente para satisfazer o QC de preparação de exossomas.
(6) Quantificação precisa: suporte à quantificação absoluta / relativa, baixo volume de amostra + alta repetibilidade, adaptação ao desenvolvimento de marcadores de biopsia líquida para acelerar a pesquisa científica para a transformação clínica.
* Este artigo foi reproduzido do número público do WeChat "ProteinSimple"
* Referências:
1. Exosomas, D M Pegtel e S J Gould, Revisão Anual de Bioquímica, 2019, 88:487-514.
2. Vesículas extracelulares – biomarcadores e efetores do interatome celular no câncer, J Rak, Fronteiras em Farmacologia, 2013, 4:21.
3. Exossomas como sistemas terapêuticos reconfiguraveis, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari e I Mendes Pinto, Tendências em Medicina Molecular, 2017, 23(7):636–650.
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ProteinSimple é uma marca de análise de proteínas da Bio-Tech Group (NASDAQ: TECH), uma empresa listada na Nasdaq nos Estados Unidos. “Simplificar a análise de proteínas” é a visão da ProteinSimple. A ProteinSimple tem sido dedicada a desenvolver e produzir ferramentas inovadoras de análise de proteínas mais precisas, rápidas e sensíveis, incluindo caracterização de carga de proteínas, análise de pureza de proteínas, teste quantitativo de modificação pós-tradução de proteínas, tecnologias de imunodetecção de proteínas como Western Blot digital e ELISA múltiplo de microfluido de alta sensibilidade, para ajudar cientistas em áreas como biofarmacêutica, terapia celular e genética, biomédica e ciências da vida a resolver problemas de análise de proteínas, acelerar a eficiência do desenvolvimento de medicamentos e analisar profundamente a relação entre proteínas e doenças.Como um agente autorizado da ProteinSimple na região oriental da China (Jiang, Zhe, Shanghai, Anhui, Shandong), a Shanghai HaoXi fornecerá equipamentos de instrumentação da ProteinSimple.
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