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Shanghai Jintong Instrument Co., Ltd
Do básico ao avançado: Guia de operação do microscópio invertido Leica
Datas:2025-07-18Leia:0
Microscópio invertido LeicaCom sua configuração flexível de objetivos e design de suporte para uma variedade de amostras, torna-se um instrumento de pesquisa em culturas celulares, cortes de tecidos e ciência de materiais. Dominar suas habilidades operacionais pode aumentar a eficiência experimental e prolongar a vida útil do instrumento. Aqui seguem detalhes passo a passo, das operações básicas às técnicas avançadas.
Operação básica: inicialização de especificações e observação de amostras
1- Preparação ambiental e inicialização
Depois de ligar a fonte de alimentação, ligue o interruptor de alimentação do microscópio e, até que o campo de visão do óculo se ilumine, ligue a fonte de luz fluorescente (se for necessário observar a fluorescência). Nota: a fonte de luz fluorescente precisa ser pré-aquecida por 5 a 10 minutos para alcançar uma intensidade de luz estável e evitar interrupções frequentes para prolongar a vida da lâmpada.
Ajuste a base do microscópio para o estado estável para evitar que as vibrações afetem a imagem (recomenda-se colocar em uma mesa anti-choque ou em uma almofada de borracha grossa).
Posicionamento e foco da amostra
Coloque o prato de petri, a placa porosa ou o portador de vidros no centro da mesa de transporte para garantir que a amostra esteja bem abaixo do objetivo (inverte o objetivo do microscópio para cima e coloque a amostra de cima).
Primeiro, use o foco grosseiro com lentes duplas baixas (por exemplo, 4X ou 10X): use o botão grosseiro para baixar lentamente o objetivo para se aproximar da amostra (cuidado para evitar o toque) e, em seguida, gire lentamente para a imagem ser clara. Ao trocar o objetivo duplicado (por exemplo, 20X, 40X), é necessário ajustar o botão de ajuste fino, devido à curta distância de trabalho do objetivo, a operação precisa ser mais suave.
3. Via óptica e regulação de imagem
Ajustar a altura do foco e o tamanho da abertura: a posição do foco é baixa e a abertura aumenta quando o espelho é observado; Para aumentar o contraste, é necessário aumentar o foco e reduzir a abertura.
Observando com óculos, ajuste o botão de foco grosso/fino para que a imagem seja mais clara, evitando que o foco excessivo danifique o objeto ou a amostra.
Habilidades avançadas: expansão funcional e imagem precisa
1. Observação de fluorescência e troca de canal
Para obter imagens de fluorescência, verifique primeiro que o bloco de filtro tenha mudado para o canal de fluorescência de destino (por exemplo, DAPI, FITC, TRITC) através do disco giratório do bloco de filtro no lado do microscópio.
Ajustar a intensidade da luz de excitação da fluorescência: para evitar que o brilho excessivo cause a extinção da fluorescência, a intensidade da luz pode ser aumentada gradualmente através do botão de ajuste da tensão ou do controle do software (se conectado ao computador) até que o sinal seja claro e o ruído de fundo seja baixo.
Diferenças com imagem DIC
Observação da diferença de fase: inserir um anel de fase (que deve corresponder ao objetivo, como o objetivo 10X corresponde ao anel de fase 10X), ajustar a posição da placa de fase do foco para melhorar o contraste de amostras sem mancha (como células vivas).
DIC (contraste de interferência diferencial) observação: instalar o prisma DIC, através da regulação do ângulo de polarização do prisma e botões de regulação da ênfase da luz, destacando a estrutura sutil da amostra (por exemplo, esqueleto celular, borda da membrana celular).
Captura de imagem e otimização de parâmetros
Se você conectar uma câmera digital, configure o tempo de exposição e o ganho através de um software, como o Leica Application Suite: o tempo de exposição é reduzido em espelhos multiplicadores mais altos (para evitar a sobreexposição), e a imagem de células vivas pode aumentar o ganho adequadamente para aumentar o brilho.
Para filmagens multicanal, imagens de campo claro, fluorescente ou diferencial devem ser capturadas separadamente e sobrepostas ou comparadas no software para garantir parâmetros consistentes (como o mesmo campo de visão, o mesmo tempo de exposição).
Manutenção e precauções
Limpeza da lente: Use papel de lente especial ou sopre um balão para limpar a poeira da superfície da lente, evitando o contato direto com a lente; Se o líquido estiver contaminado, limpe suavemente com etanol sem água.
2. manutenção da mesa de carregamento: evitar amostras agudas e rasgar a superfície da mesa de carregamento, limpar oportunamente o meio ou líquido residual após o uso.
Processo de desligamento: desligue a fonte de luz fluorescente (precisa ser resfriada até a temperatura ambiente e desligada), vire o objetivo para a posição de duplicação baixa (para evitar a pressão prolongada do objetivo de duplicação alta), e finalmente desligue a fonte de energia do anfitrião.
Microscópio invertido LeicaDesde o foco básico até a imagem avançada, cada passo exige um equilíbrio entre especificações e detalhes. Conheça suas principais habilidades para obter imagens de alta qualidade de forma eficiente, mas também para aproveitar o desempenho do instrumento e fornecer suporte confiável para pesquisas e experimentos.