A placa de cromatografia de camada fina de silicone H (placa de cromatografia de camada fina de silicone H, abreviadamente placa TLC) é uma ferramenta analítica comumente usada, amplamente usada em química, farmacêutica e outras áreas para separar e analisar os componentes de diferentes substâncias. A estratificação de camada fina (TLC) é uma técnica de separação baseada nas diferenças de distribuição de substâncias entre a fase fixa e a fase de fluxo. Abaixo estão as etapas básicas do método experimental de placa de laminação fina de placa de silicone H:
Materiais e equipamentos
Placa de análise de camada fina de silicone H (Silicagel HTLCplate)
Sistema de solventes (fase de fluxo, geralmente mistura de solventes)
Solução de amostra
Reagentes de pulverização (por exemplo, amônia, detectores de luz ultravioleta, etc.)
Rancos de desenvolvimento (por exemplo, rancos de vidro)
Capilares (para amostragem)
Lâmpadas ultravioletas ou outros agentes de coloração (como vapor de iodo para coloração)
Tubos, cilindros, etc.
Passos experimentais
Preparação da placa TLC
Para cortar a placa de silicone H, geralmente escolher o tamanho adequado, comumente uma placa pequena de 2,5 cm x 7,5 cm.
Use um lápis para marcar suavemente a linha inicial (geralmente 1-2 cm da parte inferior da placa), onde a amostra é pontuada.
2. Preparar a solução da amostra
As amostras a serem analisadas são dissolvidas em solventes apropriados, geralmente entre 1-5 mg/mL. Tenha em conta a sua compatibilidade com a fase de fluxo ao usar o solvente.
3. como
Use um capilar para apontar cuidadosamente a solução da amostra na linha inicial da placa TLC. Ao fazer a amostra, cada vez que a amostra é feita, espere que o solvente esteja limpo para evitar a overdose da amostra.
Várias amostras podem ser ordenadas, mas mantenha uma distância apropriada entre elas para evitar separações incompletas.
4. Preparação de tanques de desenvolvimento e solventes
Adicione a quantidade adequada de fase de fluxo (solvente) no compartimento de desenvolvimento de vidro. A seleção da fase de fluxo deve ser selecionada de acordo com a polaridade da substância alvo, e os sistemas de solventes comuns, tais como orthohexano, éster de acetato etílico, cloroformo, metanol e outras misturas.
A superfície do solvente deve estar abaixo da linha inicial da placa TLC para evitar que a amostra seja dissolvida no solvente.
Desenvolvimento (Separação)
Coloque a placa TLC revestida com a amostra verticalmente no compartimento de desenvolvimento para garantir que o fundo da placa esteja imerso no solvente, mas sem entrar em contato com o ponto da amostra.
Deixe o solvente subir ao longo da placa TLC e separar a amostra. A fronteira do solvente subiu para o topo da placa quando parou de se desenvolver.
Se necessário, um dispositivo de condensação pode ser usado para manter o vapor do solvente no tanque, tornando o processo de desenvolvimento mais uniforme.
6. Remover e secar
Retire a placa TLC do tanque de desenvolvimento e marque a posição da fronteira do solvente com lápis.
Coloque a placa TLC no ar ou use um forno para secá-la para garantir que o solvente seja totalmente volátil.
7. Teste
Se a amostra tiver propriedades de absorção ultravioleta, a placa TLC pode ser irradiada diretamente com luz ultravioleta para observar a localização da mancha separada.
Se a amostra não é absorvente de UV, a reação de coloração pode ser realizada usando um spray de reagente de coloração (por exemplo, amônia, vapor de iodo, reagente com enxofre, etc.).
Observadas sob a luz colorida ou ultravioleta, diferentes manchas podem ser vistas e a velocidade de movimento das manchas (valor de RF) pode ser usada para identificar a substância.
8. Resultados da análise
O valor de Rf (distância de migração da mancha / distância de migração da fronteira do solvente) de cada ponto de separação é medido e analisado comparando o valor de Rf da substância padrão conhecida.
Precauções
Escolha do solvente: de acordo com as diferentes substâncias, escolha o sistema de solvente adequado para garantir um bom efeito de separação.
Quantidade e precisão da amostra: a quantidade da amostra não deve ser excessiva para evitar que a amostra se dissolva incompletamente ou que as manchas sejam grandes demais.
Sealabilidade do tanque de desenvolvimento: Certifique-se de que o tanque de desenvolvimento esteja bem selado para evitar que o solvente evapore rapidamente demais.
Ambiente experimental: durante o experimento, evite excesso de vibração e fluxo de ar para não afetar o efeito de separação.
Com essas etapas, você pode realizar experimentos de estratificação fina com placas H de silicone para separar e analisar com sucesso amostras complexas.