Tecnologia - Aplicações da Indústria

A cromatografia de fase líquida (HPLC) é um dos instrumentos de teste mais usados ​​em laboratórios de análise, com aplicações cada vez mais amplas. Durante o uso deste instrumento, inevitavelmente surgem vários problemas e afetarão diretamente a precisão dos dados medidos e o funcionamento normal do instrumento. Se o operador for capaz de entender as causas das falhas, pode entender claramente os métodos para prevenir e eliminar essas falhas, pode usar o instrumento corretamente e maximizar o desempenho do instrumento. Hoje vamos compartilhar com você algumas questões a serem observadas no uso de um cromatografo líquido.

Solução de análise de componentes | Solução de análise de superfície | Sistema de pré-tratamento de amostras | Solução de análise de superfície | Ensaios de dureza | Ensaios mecânicos | Amostras padrão

Problemas com o uso de tubos de ensaio

1) Problemas de limpeza do tubo de ensaio. A cromatografia líquida é um método de análise muito sensível, que pode afetar a precisão dos resultados do teste se o uso de tubos de ensaio sujos. Por exemplo, no uso de metanol como solvente para dissolver a amostra, o pequeno tubo de ensaio usado é feito com tampas de borracha para fazer a tampa, portanto, em cada amostra, há uma presença de pico de interferência fixo de tempo de retenção, depois de ser confirmado, este pico de interferência é produzido por metanol mergulhado em tampas de borracha e dissolvido por componentes, substituído por tubos de ensaio de vidro, o pico de interferência é eliminado.

Problemas de dissolução de tubos de ensaio de plástico. Nos últimos anos, tubos de ensaio de plástico descartáveis ​​trouxeram uma grande conveniência para o pessoal do teste, no entanto, no processo de uso, deve prestar atenção ao fenômeno de dissolução do solvente orgânico no tubo de ensaio, ao usar este tipo de tubo de ensaio para extrair amostras, alguns solventes orgânicos (como lvfang, etc.) na parede do tubo têm o fenômeno de dissolução, essas substâncias dissolvidas às vezes também podem gerar sinais no detector, interferindo com a determinação da amostra. Neste momento, as mesmas condições experimentais podem ser testadas primeiro para ver se o líquido extraído não contém o extrato no detector pode gerar um sinal de interferência, se houver sinal de interferência, você só pode substituir o tubo de teste de vidro resistente ao solvente orgânico.

Problemas de adsorção da amostra testada na parede do tubo de ensaio. Este problema também deve chamar a atenção, caso contrário, também afetará a precisão dos resultados do teste, no monitoramento de drogas terapêuticas (TDM), algumas drogas testadas, como amitilina, propirazina e outras, são facilmente adsorvidas na parede do tubo do tubo de teste de vidro, portanto, é aconselhável usar tubos de polipropileno na operação, para evitar a ocorrência do fenômeno de adsorção na extração, pode ser usado 0,5% de líquido de diaminaxano como extraente, que pode efetivamente prevenir a adsorção.

Problemas de operação da válvula de amostragem

Atualmente, a válvula de amostragem comumente usada no cromatográfico líquido analítico é a válvula de amostragem tipo 7725, a sua estrutura interna de válvula de seis vias torna a operação de amostragem muito conveniente, mas, se usado incorretamente, também trará problemas. Por exemplo, durante os experimentos de cromatografia de fase líquida, às vezes há picos cromatográficos anormais e problemas de má reprodutividade, principalmente devido a métodos operacionais inadequados, para resolver esses problemas, é necessário começar com os seguintes aspectos.

1) Controle da quantidade de amostragem. Quando a válvula de amostragem é usada para amostragem, o anel de amostra dentro da válvula é quantitativo (o volume do anel de amostra da válvula de amostragem analítica geral é de 20ul), devido à amostragem, a solução de amostra injetada na válvula de amostragem tem um gradiente de velocidade radial no tubo do anel de amostra (ou seja, o eixo do tubo é mais rápido do que a velocidade do fluxo líquido na parede do tubo). Portanto, para encher o anel de amostra com solução de amostra e, assim, usar uma válvula de amostra para quantificar com precisão, o volume de amostra deve ser maior do que o dobro do volume do anel de amostra. Se uma seringa for usada para controlar a quantidade de entrada de amostra, o zui só pode injetar 1/2 do volume do anel da amostra para evitar que parte da amostra seja derramada pelo tubo de derramamento, resultando em erros de análise quantitativa.

2, problema de limpeza da válvula de amostragem. Se houver resíduos da amostra no anel da amostra da última injeção, inevitavelmente contaminará a amostra da próxima injeção, para evitar que esse fenômeno ocorra, deve seguir as seguintes etapas: a. Primeiro, na posição de carga, com a seringa para injetar a fase de fluxo na válvula de amostragem para limpar várias vezes, cada dose de cerca de 40ul; b. Em seguida, a placa da válvula de amostragem para a posição de injeção, e depois para a fase de fluxo para limpar várias vezes, cada dose ainda é de 40ul; c.zui depois, injetar a amostra na válvula de amostragem.

Seguindo as etapas acima, a poluição causada pela válvula de amostragem pode ser evitada, eliminando o pico de interferência e melhorando a precisão dos resultados da análise.

3, bloqueio do tubo de derramamento da válvula de amostragem. Às vezes, o tubo de derramamento da válvula de entrada ocorre bloqueio, a agulha de injeção não se move quando a amostra é injetada na válvula de entrada. Esta falha é causada pelo bloqueio do tubo de derramamento. A causa do bloqueio é principalmente devido ao fluxo de amostras dissolvidas usando uma solução salina, que é cristalizada na porta de esvaziamento do tubo de derramamento. Neste momento, você pode usar uma pequena copa com uma pequena quantidade de água destilada para mergulhar ligeiramente na abertura do tubo de derramamento, o cristal do sal no porto pode ser dissolvido e resolvido problemas. Esta falha pode ser evitada se, após a conclusão de cada amostragem, o sal no tubo de derramamento é lavado repetidamente com água destilada.

Problema da Fase Móvel (MOBLE PHASE)

O metanol e o acetonitril são frequentemente usados ​​na cromatografia líquida para preparar a fase de fluxo. Os reagentes comumente usados ​​em cromatografia líquida são reagentes de alta qualidade, como os reagentes puros de cromatografia. Quando os requisitos são menos rigorosos, os reagentes puros de alta qualidade e até puros analíticos também podem ser usados. Detectores UV são frequentemente usados ​​na cromatografia líquida, portanto, considerando a redução do ruído da linha de base e a melhoria da sensibilidade analítica, um reagente cromatográfico puro com absorção ultravioleta pequena e baixo teor de impurezas deve ser usado.

1) Filtração de fluxo. A fase de fluxo bem preparada deve ser filtrada primeiro com um filtro microporoso de 0,5 um de diámetro antes de ser usada. Isto é porque a solução contém muitas partículas minúsculas difíceis de encontrar ao olho nu, se não filtrá-las, bloqueará a abertura da bomba, o filtro na cabeça da coluna, bloqueando o canal normal da fase de fluxo, aumentando a resistência da coluna cromatográfica, aumentando a pressão da coluna e diminuindo o efeito da coluna. Quando isso acontecer, substitua a fase de fluxo filtrada e retire o filtro bloqueado e mergulhe em 20% de solução de água de ácido nítrico durante 20 minutos em uma máquina de limpeza por ultra-som para remover o bloqueio do filtro.

2 - Desgasificação da fase de fluxo. A fase de fluxo deve ser desgasificada antes de ser usada para remover o máximo possível os gases dissolvidos na fase de fluxo, caso contrário, esses gases podem reduzir o desempenho do preenchimento da coluna e causar grandes interferências no sinal do detector. Existem vários métodos de desgasificação, como desgasificação por ultra-som, desgasificação a vácuo, desgasificação de nitrogênio, etc. O método de desgasificação a vácuo e o método de desgasificação de fluxo de nitrogênio são o método de desgasificação comumente usado atualmente. Uma grande quantidade de bolhas é produzida após a mistura de água e metanol, e se não for usada sem desgasificação, as bolhas entrarão na coluna cromatográfica e no detector e afetarão o curso normal do trabalho de análise.

Utilização e manutenção de colunas cromatográficas

A coluna cromatográfica é o componente principal do cromatográfico de fase líquida, a substância a ser testada pode ser bem separada e determinada, e o desempenho da coluna cromatográfica desempenha um papel decisivo. Portanto, no trabalho diário, deve prestar especial atenção ao uso correto e manutenção da coluna cromatográfica para prolongar a vida útil da coluna cromatográfica.

Usar colunas pré-colunas e colunas de proteção. A pré-coluna, instalada entre a bomba e o amostrador, fornece um equilíbrio* para a fase de fluxo na coluna cromatográfica e impede que componentes ou poluentes que possam danificar o preenchimento da coluna entrem na coluna cromatográfica. A coluna de proteção (coluna de guarda) pode bloquear a entrada de componentes que podem ser firmemente aderidos à coluna cromatográfica, a coluna de proteção deve ser a mesma que o preenchimento da coluna cromatográfica. A pré-coluna e a coluna de proteção podem ser substituídas com frequência sem a necessidade de substituir a coluna cromatográfica com frequência, o que prolonga a vida útil da coluna cromatográfica.

Impedir que o gás entre na coluna cromatográfica. Algumas colunas cromatográficas (como colunas de gel) não permitem a entrada de bolhas, caso contrário, reduzirão o efeito da coluna e até formarão pequenas câmaras de gás difíceis de remover. Portanto, para evitar que as bolhas entrem na coluna cromatográfica, certifique-se de usar a fase de fluxo desgasificada e siga rigorosamente os passos a seguir para instalar a coluna cromatográfica. a. Desmontar o parafuso de vedação na entrada da coluna cromatográfica inferior para observar se o solvente se infiltrou; b. Se houver infiltração de solvente, a coluna cromatográfica pode ser ligada ao tubo para evitar a entrada de bolhas; c. Se nenhum solvente for filtrado, indica que esta extremidade da coluna cromatográfica já entrou no ar, neste momento, a extremidade de saída da coluna cromatográfica pode ser ligada à válvula de entrada de amostra para fluir para lavar a coluna cromatográfica na direção oposta, a fim de excluir o ar dentro da coluna. Colocar a coluna com um pequeno fluxo de 0,2 ml / min, se a velocidade de fluxo do solvente for muito rápida ou o aumento súbito da pressão levará à redução do desempenho da coluna; Se o solvente não contém bolhas, o gás dentro da coluna foi eliminado e a coluna cromatográfica foi ligada na direção correta para que a bolha não possa entrar na coluna cromatográfica.

3 - Limpeza da coluna cromatográfica. Para evitar que a substância testada e as impurezas permaneçam na coluna cromatográfica, a coluna cromatográfica deve ser limpa oportunamente após a conclusão de cada análise da amostra. Primeiro, usar um solvente forte capacidade de lavagem da amostra medida para lavar a coluna de cromatografia, por exemplo, a cromatografia de fase inversa comumente usada no trabalho de análise, porque a primeira substância de saída é uma substância polar grande, neste momento a aplicação de 100% de metanol ou o uso de isopropileno, tetrahidrofurano e outros solventes polares ligeiramente fracos absorverão a substância polar pequena dentro da coluna, a quantidade de lavagem é geralmente 20 vezes o volume da coluna. Se a fase de fluxo for uma solução tampão, a coluna de cromatografia deve ser lavada primeiro com água destilada para remover o sal dentro da coluna e, em seguida, com o solvente adequado.

A coluna de gel usada na cromatografia de filtração em gel é frequentemente usada como uma solução tampão para a fase de fluxo, e é claro que deve ser lavada com água destilada após o uso. Se for operação contínua, a solução tampão pode ser colocada na coluna durante a noite, mas mantenha uma pequena velocidade de fluxo (< 0,5 ml / min) para evitar a precipitação de sal tampão, se a fase de fluxo contém halogenos, mesmo durante a noite, a coluna cromatográfica deve ser lavada com água destilada para evitar a corrosão da coluna.

4. armazenamento da coluna cromatográfica. Se a coluna cromatográfica não for usada temporariamente, observe os seguintes pontos ao armazenar:

A colocação de curto prazo dentro de alguns dias, deve primeiro lavar a coluna cromatográfica com solvente (como a coluna de gel para lavar com água destilada), em seguida, as duas extremidades da coluna cromatográfica podem ser seladas com parafusos de vedação.

b. Se a coluna cromatográfica não for usada por muito tempo, apenas o tratamento com o método acima não é possível, então a coluna cromatográfica deve ser usada com o solvente indicado nas instruções para encher a coluna cromatográfica, a coluna de fase inversa geralmente usa metanol, a coluna de fase positiva pode ser usada com hexano ou heptano, e a coluna de gel não pode usar água, porque o crescimento de micróbios na coluna diminuirá a eficácia da coluna, a aplicação de 0,05% de solução de água NaNs (conservante) para lavar a coluna cromatográfica e selar a coluna cromatográfica. Quando a coluna cromatográfica é colocada a longo prazo, certifique-se de selar as duas extremidades da coluna cromatográfica para evitar o fenômeno de secagem do enchimento da coluna devido à volatilidade do solvente, pois isso pode levar a uma grave redução do efeito da coluna.

A coluna cromatográfica deve ser armazenada a temperatura ambiente, se colocada em um ambiente abaixo de 0 ° C, a coluna congelará, o que também levará à redução do efeito da coluna.

Problema dos picos duplos da cromatografia

Após o uso prolongado da coluna cromatográfica, se houver impurezas na entrada da coluna cromatográfica, fará com que a fase fixa na entrada da coluna cromatográfica "placa" e sob o efeito da alta pressão gerada pela fase de fluxo, formando o colapso da cabeça da coluna, o pico cromatográfico normal da composição da amostra analisada se tornará o pico duplo, então pode ser reparado de acordo com os métodos abaixo para a coluna cromatográfica. Primeiro, gire a porca de fixação da cabeça do cilindro para baixo, então você encontrará que a fase fixa dentro da cabeça do cilindro foi comprimida e pode ser retraída mais de 10 mm quando é grave. Neste caso, podemos cortar a parte amarela da placa de superfície de fluxo com a ponta da agulha e preencher e compactar esta área de colapso com a mesma fase fixa, e depois apertar o parafuso de fixação da coluna cromatográfica, o trabalho de reparação termina. Quando a amostra é feita com uma coluna cromatográfica reparada, o pico cromatográfico retorna ao normal.

O uso correto do cromatômetro e métodos de resolução de problemas são descritos acima em vários aspectos. No trabalho diário, se essas questões forem levadas a sério e os problemas forem resolvidos a tempo, o período de uso normal do instrumento será amplamente prolongado e o desempenho do instrumento será maximizado.