A calibração diária e a validação do espectrofotômetro visível ultravioleta é a chave para garantir a precisão dos dados, incluindo principalmente a calibração de comprimento de onda, a calibração de absorção de luz, a calibração de linha de base e a validação de desempenho, como segue:
Calibração de comprimento de onda
Utilização de lâmpadas padrão: Calibrar usando a linha de emissão característica de lâmpadas de mercúrio ou de deutério (por exemplo, 253,7 nm e 365 nm de lâmpadas de mercúrio). Configure o instrumento em comprimentos de onda específicos, coloque a lâmpada de calibração, ajuste o caminho de luz para que ele passe pela piscina de amostras, observe picos de absorção e registre valores reais de comprimentos de onda, contraste com comprimentos de onda padrão, desvio ultrapassa a função incorporada do instrumento ou ajuste manual da correção de raster.
Utilização de filtros padrão: Utilize filtros de vidro dopado Ho³+ para varrer os picos de absorção característicos (por exemplo, 418nm, 450nm) e corrigir os valores indicados de comprimento de onda. Este método não requer uma mudança complexa de fonte de luz, mas requer a substituição regular do filtro (recomendado 1 vez por ano).
Calibração de absorção
Método de solução padrão de transmissão:
Zona visível: Use solução de sulfato de cobre (CuSO4 · 5H₂O, λ = 640nm, A = 0,5).
Zona ultravioleta: uso de solução de pesacromato de potássio (K₂Cr₂O7, λ=350nm,A=0.5)。
Requisitos de formulação: uso de reagente analítico puro com garrafa de capacidade de nível 1, a vida útil da solução não excede 7 dias. Usando um vaso de quartzo de 1 cm, com ar como referência, a piscina de amostra deve ser lavada 3 vezes com líquido de referência antes da medição. É necessário medir o RSD ≤ 0,3% três vezes consecutivas, caso contrário, é necessário recarregar o líquido.
Método de filtro neutro: quando a absorção é > 1,5 AU, introduza uma combinação de filtro neutro (por exemplo, sobreposição OD = 0,5 + 1,0) para corrigir o desvio da lei de Beer através da adaptação de vários pontos.
Calibração de linha de base
Use um solvente em branco (como água destilada) como referência para medir sua absorção. Ajuste o dispositivo de ajuste de linha de base do instrumento para que o valor de absorção do solvente vazio seja zero. Repita a medição várias vezes para garantir a estabilidade da linha de base.
IV. Verificação do desempenho
Verificação de precisão: Preparar uma série de soluções padrão em diferentes concentrações, medir a absorção de cada solução padrão separadamente, calcular sua média e desvio padrão e avaliar a precisão do instrumento.
Verificação de repetibilidade: medição contínua de várias vezes com a mesma solução padrão, cálculo do valor de absorção de cada medição, obtenção da média e desvio padrão, avaliação da repetibilidade do instrumento.
Validação linear: preparar uma série de soluções padrão de diferentes concentrações, medir a absorção de cada solução padrão separadamente, desenhar uma curva de absorção-concentração, calcular o coeficiente de correlação linear da curva, avaliar a linearidade do instrumento.