Introdução

O sulfato de neomicina é um antibiótico multicomponente de aminoaçúcares isolado dos metabólicos de Streptomyces fradiae, com um grande efeito antibacteriano, devido à sua toxicidade renal e orelha, para uso clínico externo e oral. As matérias-primas de sulfato de neomicina estão registradas em farmacêuticas nacionais e estrangeiras［1-5］- É.

A versão de 2025 do Farmacópio Chinês entrará em vigor a partir de 1º de outubro de 2025. O sulfato de neomicina nesta revisão do farmacêutico, foi adicionado um novo teste de substâncias relevantes, para determinar os limites de neomicina, neomicina A e outras impurezas. Este método é uma cromatografia líquida de alta eficiência, usando uma coluna cromatográfica C18 para separar os componentes acima, a fase de fluxo é uma solução de ácido trifluoroacetico / pentafluoropropionato / hidroxido de sódio, o detector é um detector de amperes de pulso［6］. Quando esta condição cromatográfica é executada em um cromatográfico de fase líquida, muitas vezes existem os seguintes problemas:

Instabilidade do sistema, diminuição gradual da sensibilidade e má reprodutividade;

Efeito da coluna cai rapidamente, a vida da coluna cromatográfica é curta;

A fase de fluxo contém um alto teor de sal e íons para o reagente, com desafios associados ao espectro de massa.

Como fornecedor de serviços de análise científica, a SymerFly oferece uma solução de cromatografia iônica de processo completo com este método. A solução inclui fluxos de cromatografia iônica, fase de fluxo, colunas cromatográficas, detectores, espectroscopia de massa em PEEK completo e software de processamento de dados profissional. Desde a formulação de fase de fluxo, a reprodução de métodos, a quantificação e a qualitatividade de impurezas, oferecemos um serviço único para ajudar os clientes a enfrentar facilmente os desafios apresentados por novos projetos farmacêuticos.

Figura 1. Estrutura da neomicina e suas impurezas

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Instrumentação e condições cromatográficas

Instrumentação: Dionex ™ Sistema de cromatografia iônica ICS-6000 com bomba dupla, caixa de temperatura de coluna e amostrador automático AS-AP

色谱柱: Thermo Dionex™ IonPac™ AmG C18 (4×150 mm, 3 μm, PN 302693)

Fase de fluxo: 2% de solução de ácido trifluoroacetico (contendo 0,01% de pentafluoropropionato, 0,6% de 50% de hidroxido de sódio)

Velocidade de fluxo: 0. 8 mL /min

Temperatura da coluna: 25 ℃;

Liquido alcalino pós-coluna: 50% de solução de NaOH diluída 25 vezes

Velocidade da solução após a coluna: 0. 3 mL /min

Volume de amostra: 25 μL

Detector: Detector de amplificador de pulso, potencial de detecção de quatro ondas

Elétrodo de trabalho: Elétrodo de ouro de 3 mm (PN 063723)

Elétrodo de referência: Elétrodo de referência Ag/AgCl (PN 061879)

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Cromatografia

Figura 2. Diagrama da separação de substâncias relacionadas com sulfato de neomicina pela coluna cromatográfica AmG C18[7](Clique para ver a imagem)

A coluna cromatográfica AmG C18 é uma coluna cromatográfica desenvolvida pela Symer Fly para antibióticos de aminoglicosídeos. A neomicina B, a neomicina C e todas as impurezas podem ser melhor isoladas. A simetria do pico principal pode separar os componentes de 13 sulfatos de neomicina.

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As faixas lineares de neomicina B, neomicina C e neomicina são mostradas na tabela abaixo[7]

(Clique para ver a imagem)

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Repetição [7]

Tome 6 amostras do mesmo lote de neomicina sulfato para medir de acordo com o método acima, a impureza total RSD (n = 6) é de 1,10%, o método é bom repetitivo.

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Identificação estrutural de impurezas desconhecidas com MS

Reagentes para pares de íons como o ácido trifluoroacetico, pentafluoropropionato e o ácido septafluorbutico são fases de fluxo comumente usadas na análise de antibióticos de aminoglicosídeos. Com o auxílio de um reagente de par iônico, substâncias antibióticas aminoglicosídicas de estrutura semelhante podem ser isoladas de forma satisfatória na coluna cromatográfica C18. Para a análise espectroscópica de massa de antibióticos aminoglicosídicos, a fase de fluxo precisa ser desalinada. O inibidor catiônico pode remover efetivamente aniões na fase de fluxo.

Figura 3. Combinação IC-MS/MS para a qualificação de impurezas antibióticas de aminoglicosídeos

(Clique para ver a imagem)

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Resumo

O sistema de análise de antibióticos de aminoglicosídeos lançado pela SymerFly não só pode atender às necessidades de detecção de sulfato de neomicina e sulfato de etilmeticina na farmacêutica chinesa, mas também é adequado para antibióticos usados ​​em outros farmacêuticos como USP, EP e HPLC-PAD, tais como sulfato de xentamycina, sulfato de aminacacina, cloridrato de macromicina, etc. O programa apresenta as seguintes vantagens:

A separação da coluna cromatográfica AmG C18 é boa, tolera a fase de fluxo de íons de baixo pH e tem uma vida mais longa;

Sistema de cromatografia iônica ICS 6000, material PEEK de fluxo completo, garante a estabilidade do sistema;

O ICS6000 vem com um detector de amperes e um eletrodo de ouro, com uma sensibilidade extremamente alta aos antibióticos da amoníase;

Dessal facilmente para atender às necessidades de associação de espectro de massa.

Temas interativos:

Quais são as suas dúvidas sobre a determinação de antibióticos com sulfato de neomicina e aminoaçúcares? O que você acha da tecnologia HPLC-PAD? Bem-vindo ao comentário!

Referências:

2ª Edição da Farmacópia Chinesa 2020

Farmacópia Europeia 9.0: Volume III

A Farmacopéia Internacional (5ª Edição)

4. The United States Pharmacopeial40-The National Formulary 35: volume III( Farmacópio Americano 40-National Prescription Set 35: Volume 3) [S]

Farmacopéia Japonesa XVII (Edição 17)

2ª Edição da Farmacópia Chinesa, 2025

7. Zhang Qian, Huang Minwen, FANG Wang, Espera um pouco. Determinação do teor de sulfato de neomicina pelo método HPLC-PAD e suas substâncias relacionadas [J].Journal of Chinese Pharmaceutical University, 2019,50(02):193-199.

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