Fundo

A bactéria Grant negativa (GNB) representa um dos maiores problemas de saúde pública em todo o mundo, pois é altamente resistente aos antibióticos e pode desencadear doenças infecciosas como pneumonia, infecções no sangue, feridas e infecções no local cirúrgico e meningite2. As endotoxinas bacterianas são um componente essencial da membrana celular GNB e, quando as concentrações são altas o suficiente, desencadeiam uma resposta térmica (ou seja, febre alta). A Administração de Alimentos e Medicamentos dos Estados Unidos (FDA) exige que as fábricas farmacêuticas façam testes de endotoxinas bacterianas (BET), concentrando-se em medir o nível de contaminação GNB de água para injeção (WFI), matérias-primas farmacêuticas, medicamentos acabados, dispositivos médicos e tudo o que envolve medicamentos injetáveis. Os métodos de detecção de endotoxinas bacterianas são os seguintes: 1. método de gel (gel-coágulo), 2. método de turbididade dinâmica (KTA, Kinetic Turbidimetric Assay), 3. método de coloração dinâmica (KCA, Kinetic Chromogenic Assay).

O reagente de amebocito (LAL, Limulus Amebocyte Lysate) é extraído do sangue da amebocita para a detecção de endotoxinas bacterianas. Quando as endotoxinas são detectadas, há uma série de reações enzimáticas em cascade de reagentes, que aumentam a manifestação das endotoxinas. Quando a endotoxina reage com o reagente, a endotoxina ativa o primeiro fator da cascade enzimática, o fator C, e depois o fator C ativa o fator B. O fator B atua no coagulante, tornando-o uma coagulante. As etapas finais de detecção são coagulação (gel), turbididade (turbididade dinâmica) ou colorização (colorização dinâmica).

Detector de endotoxinas bacterianas Sievers Eclipse

O detector Eclipse é composto por 3 partes: instrumento, placa microporosa de microfluido e software. O instrumento é um analisador de absorção de luz com controle de cultura termostática a 37 ° C e tecnologia de centrifugação. A placa microporosa possui endotoxinas padrão de referência (RSE) e controles de produto positivos (PPC), permitindo que o usuário execute curvas padrão de até 5 pontos (concentrações de 50-0,005 UE/mL) em cada teste e até 21 amostras e controles negativos e positivos. O software Eclipse é fácil de usar e está em conformidade com a 21 CFR Parte 11.

Objetivo e âmbito

O teste de LAL é vulnerável a interferências. As amostras podem conter substâncias que inibem ou aumentam a detecção de endotoxinas, resultando em resultados falsos. As amostras de ensaio são submetidas a testes de aplicabilidade do método e de inibição/reforço para determinar o múltiplo de diluição (ou outro método eficaz) necessário para superar a interferência acima.

Esta literatura aplicativa descreve como realizar um teste de inibição/reforço, como executar este teste para demonstrar a idoneidade do detector de toxinas intrabacterianas Sievers Eclipse e fornecer a idoneidade de métodos para executar amostras. As informações sobre o método incluem: o método de teste do reagente, a sensibilidade do teste (λ), o múltiplo de diluição verificado, a concentração marcada de PPC (controle de produto positivo), o diluente, o critério de %CV (coeficiente de variação) e a taxa média de recuperação de PPC.

As informações da amostra incluem a concentração da amostra (em mg/mL), o limite de endotoxinas (EL), o múltiplo máximo de diluição válida (MVD), a concentração mínima válida (MVC), o resultado médio da amostra (em EU/mL) e as condições de armazenamento/tratamento da amostra.

Detector de endotoxinas bacterianas Sievers Eclipse: uma solução eficiente e conveniente

O detector de endotoxinas bacterianas Sievers Eclipse executa de forma eficiente os testes de inibição / reforço, bem como os procedimentos de validação de produtos em 3 lotes acima. Este detector utiliza tecnologia de centrífuga avançada e métodos dinâmicos para simplificar o processo de detecção de endotoxinas. Essas vantagens permitem que este detector informe os resultados de teste com mais rapidez e precisão e forneça análises quantitativas e de interferência precisas.

As vantagens do detector Sievers Eclipse incluem:

• Eficiência: a função de automação reduz as etapas operacionais de configuração de laboratório e pipeta, melhorando o fluxo.

• Intuitivo: uma interface de usuário intuitiva simplifica as etapas operacionais, reduz os erros e melhora a qualidade dos dados.

• Conformidade: Este tester cumpre os rigorosos requisitos regulamentares para testes farmacêuticos e confiabilidade dos dados.

O detector de endotoxinas bacterianas Sievers Eclipse é um avanço tecnológico significativo no campo da detecção de endotoxinas bacterianas, fornecendo uma solução abrangente, eficiente e de conformidade para as necessidades contínuas de validação de produtos, melhorando a segurança e a qualidade dos produtos.

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