I. Introdução de antecedentes

A flora intestinal é grande e complexa, a composição e as mudanças fisiológicas da microbiota intestinal do corpo humano estão associadas a uma variedade de doenças, através do estudo dos microbios intestinais é possível entender melhor a sua relação com a saúde humana, atualmente, o trabalho de separação e cultivo da flora intestinal é essencial para este estudo.

Os métodos tradicionais de cultura de separação da flora intestinal são predominantemente no modelo de placa, devido à carga de trabalho maior, o modelo de cultura de placa tem problemas de consumo de tempo e esforço, ineficiencia e muitas vezes maus resultados de cultura.Tecnologia de microfluidização de gotasAs aplicações na cultura de separação da flora intestinal são cada vez mais relatadas, o método é dispersar a flora intestinal em gotas individuais independentes, fornecendo um espaço fechado e independente para o crescimento de espécies individuais, promovendo significativamente o crescimento de micróbios, evitando que as cepas vulneráveis ​​sejam cobertas por cepas de crescimento vantajosas, aumentando a variedade e o número de micróbios cultiváveis.

Este experimento criou automaticamente dezenas de milhares de unidades de cultura de gotas separadas usando o instrumento de célula MISS da Tianyi Bio, que dispersou os micróbios em cada gota para ser cultivados de forma independente, permitindo que diferentes espécies de indivíduos de bactérias crescessem e se multiplicaram plenamente nas gotas, eliminando ao mesmo tempo os efeitos do crescimento excessivo e do rápido crescimento das populações na cultura comunitária.Os métodos de cultura baseados em equipamentos de células MISS superam em grande medida as falhas dos métodos tradicionais de cultura de placas, proporcionando uma plataforma de pesquisa importante para a identificação e descoberta de grupos raros de simbióticos intestinais e floras anaeróbicas ambientais.

Processo experimental de cultura de bactéria intestinal isolada com base em comprimidos e dispositivos de células MISS

1. pré-tratamento da amostra para determinar a concentração a bordo

Depois de coletar a amostra de fezes para diluir, conte a placa de contagem de células sanguíneas e dilua a concentração da amostra para 10.000-30.000 CFU / mL com meio de cultura, o fluxo de trabalho é o seguinte:

2. Cultura de separação da flora intestinal em ambiente anaeróbico através de dispositivos de células MISS

Este experimento gerou um total de cerca de 20.000 gotas, após 37 ° C 30 dias de cultura anaeróbica para a detecção e classificação, após 5 horas de classificação, um total de cerca de 4.600 gotas contendo bactérios, e para a sequência de alto fluxo, o fluxo de trabalho é mostrado na figura abaixo:

3. Cultura de separação de placas para a flora intestinal

Este experimento revestiu um total de 15 comprimidos, recolhidos após 30 dias de cultura anaeróbica a 37 ° C e sequenciados com alto fluxo, o fluxo de trabalho é mostrado na figura abaixo:

4. Resultados experimentais

(1) Em comparação com o genoma fecal não cultivado, o uso de equipamentos de células MISS para separar a cultura identificou 10,9% (13/119) mais espécies de bactérias (nível gênero), significativamente superior a 0,8% (1/119) em comprimidos.

(2) A cultura de gotas líquidas melhora a riqueza de espécies em 40% do que a cultura de placas planas (nível do gênero), com melhores efeitos de enriquecimento para o gênero Bifidobacterium, Peptoniphilus, Collinsella, Phascolarctobacterium, Enterococcus e Porphyromonas.

O instrumento TIAMUKI Bio MISS Cell fornece soluções de automação eficientes e de alto fluxo para processos de separação, cultura e triagem de bactérias anaeróbicas rigorosas, como a flora intestinal

Este estudo usou o instrumento de célula MISS da Tianmi Bio para gerar um total de 20.000 gotas, selecionando cerca de 4.600 gotas monoclonais, alcançando a cultura e classificação automáticas da flora intestinal, ao mesmo tempo, com base nas vantagens da cultura de gotas, evitando o crescimento competitivo entre cepas e problemas de poluição cruzada, melhorando significativamente a riqueza bacteriana enriquecida após a cultura.

A célula MISS realizou o alto fluxo e a operação automatizada de todo o processo de experimentação de microbiota intestinal, melhorando significativamente a capacidade de cultura microbiana, reduzindo drasticamente a carga de trabalho do pessoal experimental, melhorando a eficiência do trabalho, fornecendo uma plataforma experimental automatizada de alta eficiência para a cultura monoclonal e a triagem de alto fluxo, incluindo a microbiota intestinal, fornecendo um forte apoio ao cultivo e triagem de cepas!