Microscópio confocal de luz brancaÉ uma combinação de tecnologia de imagem confocal e iluminação de luz branca de alta precisão microdispositivo, que pode alcançar imagem tridimensional de alta resolução e alto contraste de amostras, seu princípio de trabalho básico em torno do projeto de circuito óptico confocal e imagem multibanda de fonte de luz branca, especificamente como segue:
I. Fundamentos estruturais básicos
Microscópio confocal de luz brancaOs componentes principais incluem módulos de luz branca (geralmente lâmpadas halogênicas, fontes de luz compostas LED), aparelhos de apendice de agulha, osciloscópios de varredura, objetivos, sistemas de espectroscopia e detectores de imagem, onde o apendice de agulha é um componente fundamental para a obtenção de imagens confocais.
Transmissão óptica e processo de imagem
A emissão da fonte de luz e a fonte de luz branca quase direta emitem uma mistura de luz do espectro contínuo, após o tratamento da lente quase direta, forma um feixe de luz paralelo e, em seguida, muda a direção do caminho óptico através do espectroscópio (semi-reflexo semipermeável), orientando o objetivo.
A exposição da amostra e o sinal estimulam o foco do feixe paralelo através do espectroscópio, formando uma pequena mancha fotográfica projetada na superfície da amostra. As diferentes partes da amostra refletem, espalham ou absorvem a luz de diferentes bandas de luz branca, onde o sinal de luz refletida / espalhada retorna ao longo do caminho original e atravessa novamente o objeto para o sistema espectral.
Efeito de triagem de perfuras de agulha confocal Este é o elemento central da tecnologia confocal:
O sinal óptico retornado do plano focal da amostra pode ser refletido com precisão através do orifício da agulha confocal para o detector subsequente;
E a luz dispersa fora do plano focal (sinal da área não focal), devido à dispersão da luz não pode atravessar o buraco da agulha, será interceptada pelo painel do buraco da agulha e não pode participar da imagem.
Este processo realiza o efeito de "corte óptico", eliminando a interferência de fundo no plano não focal.
Espectroscopia de sinal e detecção de sinais de luz branca que atravessam o buraco de agulha entra no módulo de espectroscopia, que divide a luz branca por comprimento de onda por meio de filtros ou rastres (como os canais vermelhos, verdes e azuis da banda de luz visível), e os sinais de luz de diferentes bandas são recebidos e convertidos em sinais elétricos pelos detectores correspondentes.
Reconstrução de imagem e apresentação da vibração de varredura controlará a mancha focada na superfície da amostra para fazer varredura bidimensional ponto a ponto, linha a linha, o detector captura sincronicamente o sinal de cada ponto de varredura, em seguida, o sistema de computador converte o sinal elétrico em pontos de pixel e junta em imagens bidimensionais; Se escanear camada por camada ao longo do eixo Z (direção da profundidade da amostra), a reconstrução tridimensional da amostra também pode ser realizada através da sobreposição de imagens bidimensionais de camadas múltiplas.
Características técnicas da luz branca
Em comparação com o microscópio de confocalização a laser, a confocalização de luz branca não requer várias fontes de luz a laser, que podem alcançar imagens multibanda através de uma única fonte de luz, reduzindo o custo do equipamento e a complexidade do caminho óptico;
Com base nas propriedades espectrais amplas da luz branca, pode obter simultaneamente informações ópticas de amostras em diferentes bandas de luz visível, mais adequado para a observação de imagens de pigmentos naturais e amostras não marcadas;
O mecanismo de triagem do orifício de agulha confocal torna a resolução e o contraste da imagem muito mais elevados do que o microscópio de luz branca comum e permite a imagem de estratificação tridimensional sem danos.