Ámbito: Esta norma define as condições e métodos de ensaio para plancton em salas estériles e áreas limpas da indústria farmacêutica.

Esta norma aplica-se aos testes e à validação ambiental de plancton em salas estériles e áreas limpas, salas estériles ou áreas de purificação de ar locais, incluindo mesas de trabalho limpas, na indústria farmacêutica.

Norma de referência: GB/T 16293. 2010

Apêndice ao Código de Gestão da Produção de Medicamentos (revisão 1998).

3 Padrões

Limpeza	Número de micróbios vivos / m3
Nível 100	5
Nível 10.000	100
Nível 100.000	500

4 Métodos de teste

4.1 Resumo do método

O método utilizado nesta amostra é o método de concentração de contagem. Isto é, através da coleta de partículas biológicas suspensas no ar em um meio especializado (selecionando um meio que provavelmente suporte o crescimento de micróbios) e depois de um certo tempo e condições de crescimento apropriadas, deixá-los se reproduzir até a contagem de colônias visíveis para determinar a concentração de micróbios na sala limpa.

4.2 Responsabilidade e formação do pessoal

Os testadores de câmaras estériles devem ser treinados e qualificados para desempenhar suas funções em testes de câmaras estériles, que incluem conhecimentos de higiene envolvidos e conhecimentos básicos de microbiologia.

Os testadores da sala estéril devem escolher o modo de vestir adequado aos requisitos de limpeza do ar das operações de produção, e roupas externas não podem ser levadas para áreas acima do nível de 100.000.

4.3 Instrumentos, equipamentos auxiliares e meios de cultura

Escolha o amostrador de planctone adequado, incluindo a utilização de bombas de bombeamento sem óleo, baixa velocidade de fluxo de ar e maior fluxo de amostragem, para garantir que a distribuição de água na superfície do meio seja seca.

Este teste requer os seguintes instrumentos, equipamentos auxiliares e meios de cultura:

a) amostradores de planctone;

b) pratos de petri;

c) panela de desinfecção de alta pressão;

d) meios de cultivo;

e) Câmara de cultivo termostática;

4.4 Princípio do amostrador de planctone

Os amostradores de plancton geralmente usam o mecanismo do método de impacto, que pode ser dividido em amostradores de costura, centrífugos ou agulhas. O amostrador de junta é inalado pelo ventilador interno e, através da placa plana de junta do amostrador, o ar será injetado e impactado na superfície lenta do meio de cultura da placa plana, e as partículas de micróbios vivos ligados formarão colônias após a cultura. Devido à rotação de alta velocidade do ventilador interno, o fluxo de ar flui da frente para a parte traseira do amostrador, sob o efeito da força centrífuga, as partículas de micróbios vivos no ar têm tempo suficiente para atingir a barra de cultura sólida, aderindo às partículas de micróbios vivos após a cultura para formar colônias. O amostrador de agulha é o fluxo de ar inalado através de uma tampa metálica, a tampa é densa e mecanizada com pequenos buracos especiais, através do ventilador, o ar pequeno coletado impacta diretamente na superfície do meio de cultura plano, e as partículas de micróbios vivos ligadas formam colônias após a cultura.

4.5 Pontos de teste

4.5.1 O instrumento de ensaio deve ser inspecionado regularmente de acordo com o ciclo de inspeção do instrumento. Deve ser usado para aprovar a inspeção e usar instrumentos durante o período de validade.

4.5.2 Quando o instrumento de ensaio não entrar na área de ensaio, se necessário, primeiro limpe a superfície ou prepare e armazene no interior estéril apropriado (com uma tampa de proteção ou outra tampa de proteção externa apropriada).

4.5.3 Quando o papel estéril é usado em salas estériles do nível 100, deve ser revestido com uma capa transparente sem pó e borracha de lápis não pode ser usada em salas estériles do nível 100.

4.5.4 O instrumento de ensaio deve ser usado de acordo com as instruções.

4.5.4.1 Após a inicialização do instrumento e o pré-aquecimento até a estabilidade, o instrumento pode ser corrigido de acordo com as instruções, verificando o fluxo de amostragem e definindo o tempo de acordo com o volume de amostragem.

4.5.4.2 As aberturas de amostragem devem ser fabricadas com materiais que permitam a desinfecção e a estabilidade das propriedades químicas.

4.5.4.3 O tubo de amostragem é estritamente proibido de fugas e a parede interna deve ser lisa.

4.5.4.4 O comprimento do tubo de amostragem deve ser determinado de acordo com a altura do ponto de medição, minimizando a curvatura.

4.6 Pratos de Petri

4.6.1 Placas de Petri com especificações φ90mm x 15mm são geralmente usadas. O prato de petri adequado pode ser selecionado de acordo com o amostrador escolhido.

4.6.2 Barras de cultura sólidas para amostradores centrífugos

4.7 Mídios de cultivo

O meio de soja caséina aguana (TSA) ou o meio de sax (SDA) ou outros meios reconhecidos e comprovados pelo usuário.

4.8 Câmara de cultivo termostática

É necessário verificar regularmente a eficácia da câmara termostática

4.9 Etapas de teste;

4.9.1 O instrumento pré-ensaio e a superfície do prato de petri devem ser rigorosamente desinfetados.

4.9.1.1 Esterilizar o amostrador com o desinfetante da sala de desinfecção antes de entrar na sala de teste para amostradores em salas estériles de grau 100

Deve ser colocado antecipadamente na sala de teste.

4.9.1.2 Limpe a superfície externa do prato de petri com desinfetante.

4.9.1.3 Antes da amostragem, desinfete a tampa superior do amostrador, a placa de rotação e o interior e o exterior da tampa com desinfetante, terminando a amostragem e, em seguida, injete suavemente a parede interna da tampa e a placa de rotação com desinfetante.

4.9.1.4 A abertura e o tubo de amostragem devem ser esterilizados a alta temperatura antes de serem usados. Se as paredes externas e internas do tubo de amostragem são desinfetadas com desinfetante, os resíduos no tubo devem ser derramados e secados.

4.9.1

4.9.1.6 O instrumento de amostragem não é colocado no prato de petri após a desinfecção, abra o amostrador de plancton para que o desinfetante residual no instrumento evapore por um tempo não inferior a 5 minutos e verifique o fluxo e ajuste o tempo definido de acordo com o volume de amostragem.

4.9.1.7 Feche o amostrador de plancton, coloque-o no recipiente de petri e cubra a tampa.

4.9.1.8 Após colocar a abertura no ponto de amostragem, abra o amostrador de planctone para amostragem.

4.10 Cultivação

4.10.1 Após a amostragem completa, coloque o prato de petri invertido em uma caixa de cultivo termostática.

4.10.2 Depois de amostragem, a cultura preparada com o meio de resina de caséina de soja (TSA) é cultivada em um compartimento de cultivo de 30 ° C a 35 ° C, o tempo não deve ser inferior a 2 dias; após amostragem, a placa de petri preparada com o meio de cultivo de arena (SDA) é cultivada em um compartimento de cultivo de 20 ° C a 25 ° C, o tempo não deve ser inferior a 5 dias.

4.10.3 Cada lote de meio de cultura deve ser submetido a um ensaio controlado para verificar se o próprio meio de cultura está contaminado. 3 pratos de petri podem ser selecionados para cada lote de cultura de controle.

4.11 Contagem de colônias

4.11.1 Contar, marcar ou contar diretamente todas as colônias no prato de Petri a olho nu e, em seguida, verificar com uma lupa de 5 a 10 vezes se há falhas.

4.11.2 Se houver sobreposição de duas ou mais colônias em uma placa plana, as duas ou mais colônias serão contadas para a distinção.

4.12 Observações

4.12.1 A qualidade de cada prato de petri deve ser cuidadosamente verificada antes de uso, o meio de cultura e os pratos de petri não podem ser usados ​​com deterioração, danos ou contaminação.

4.12.2 Registrar detalhadamente o meio, as condições de cultivo e outros parâmetros.

4.12.3 Devido à grande variedade de bactérias, a diferença é grande, a contagem geralmente é observada cuidadosamente com a luz transmitida na superfície do prato de petri ou na superfície real, não há colônias que crescem na borda do prato de petri, e as colônias bacterianas ou os sedimentos do meio de cultura devem ser diferenciados, se necessário, identificados com o microscópio.

5 Regras do teste

5.1 Condições de teste

Antes do teste, os parâmetros relacionados com a câmara estéril devem ser pré-testados, testando as condições ambientais das partículas em suspensão, por exemplo: este pré-teste pode incluir:

a) Teste de temperatura e umidade relativa. A temperatura e a umidade relativa da câmara estéril devem ser adequadas às suas exigências de produção e processo.

Deve (sem requisitos especiais, o controle da temperatura é de 18 ° C a 26 ° C, o controle da umidade relativa é conveniente entre 45% e 65%). ao mesmo tempo cheio

Âmbito de utilização do instrumento de teste de pé;

b) Ensaios de fluxo de ar interior ou de velocidade do vento, ou de diferença de pressão;

c) Teste de vazamento de filtros

5.1 Estado do teste

Tanto estático quanto dinâmico podem ser testados.

No teste estático, o teste interior não deve ter mais de duas pessoas.

Antes do teste de plancton, a câmara estéril (área) é determinada pelo usuário para determinar se a pré-desinfecção é necessária.

Os testes de planctone devem indicar o estado e o número de pessoas que foram usadas para o teste.

5.3 Tempo de teste

5.3.1 Em ensaios a vazios ou estáticos, para câmaras estériles de fluxo unidirecional, o ensaio deve começar após o tempo de funcionamento normal do sistema de ar condicionado purificado não inferior a 10 minutos. Para câmaras estériles de fluxo não unidirecional, o teste deve começar após o tempo de funcionamento normal do sistema de purificação não inferior a 30 minutos. No teste estático b, a limpeza de fluxo unidirecional é (área), o teste deve começar após a evacuação do operador de produção do local e após 10 minutos de auto-limpeza; Para câmaras estériles não unidirecionais, o teste deve começar após a evacuação do operador de produção do local e após 20 minutos de auto-limpeza.

5.3.2 Durante os ensaios dinâmicos, a hora de início da produção e a hora do ensaio devem ser registrados.

5.4 Cálculo da concentração de plancton

5.4.1 Número de pontos de amostragem e sua disposição

5.4.1.1 Menos pontos de amostragem

A posição do ponto de amostragem do plancton pode ser referida a GB / T16292-2010

a) Localização do ponto de medição da área de trabalho de cerca de 0,8 a 1,5 m do solo (ligeiramente acima da superfície de trabalho).

b) A posição do ponto de medição da abertura de alimentação deixa a superfície de alimentação de ar cerca de 30 cm.

c) Pontos de medição podem ser adicionados em equipamentos críticos ou atividades de trabalho críticas.

5.4.2 Pequena amostragem

As pequenas quantidades de amostragem de plancton são mostradas na Tabela 1.

Tabela 1 Pequena amostragem

Limpeza	Quantidade de amostragem L / vezes
Nível 100	1000
Nível 10.000	500
Nível 100.000	100
Nível 300.000	100

5.4.3 Número de amostragens

Cada ponto de amostragem é geralmente amostrado uma vez.

5.4.4 Precauções de amostragem

5.4.4.1 Para câmaras estériles de fluxo unidirecional ou aberturas de alimentação de ar, a abertura de amostragem do amostrador deve estar na direção correta do fluxo de ar; Para câmaras estériles de fluxo não unidirecional, a boca de amostragem é para cima.

5.4.4.2 Ao colocar os pontos de amostragem, deve-se evitar, pelo menos, as aberturas de retorno com maior concentração de partículas de poeira.

5.4.4.3 Durante a amostragem, o sujeito ao ensaio deve estar do lado do vento abaixo da abertura de amostragem, com o mínimo de movimentos.

5.4.4.4 Tomar todas as medidas para evitar a contaminação do processo de amostragem e outras possíveis contaminações da amostra.

5.4.4.5 Os pratos de petri são usados ​​para a inspeção, para evitar os efeitos causados pelo transporte ou movimentação dos pratos de petri, é aconselhável realizar simultaneamente um teste de controle negativo, um prato de controle para cada vez ou cada área, operar da mesma forma que o prato de amostragem, mas não expor o prato de amostragem, em seguida, juntamente com o prato de petri após amostragem (TSA ou SDA) para ser colocado em uma caixa de cultivo, o resultado deve ser um crescimento sem colônias.

5.5 Registros

O relatório de teste deve incluir o seguinte:

a) Nome e endereço do testador e data do teste;

b) Base de teste

c) Localização plana da sala estéril de ensaio (indicando, se necessário, a localização plana da área adjacente);

d) Descrição do instrumento de ensaio e dos seus métodos de ensaio, incluindo as condições ambientais de ensaio, o número de pontos de amostragem e os planos, o número de ensaios, o fluxo de amostragem ou as possíveis alterações nos métodos de ensaio, o certificado de inspeção do instrumento de ensaio, etc.; Para testes dinâmicos, o número e a localização dos operadores no local, o número e a localização dos equipamentos operacionais no local também devem ser registrados;

e) Resultados: incluem todos os cálculos estatísticos.

5.6 Resultados do cálculo

5.6.1 Calcular o número de colônias em cada prato de Petri.

5.6.2 Cálculo da concentração média de plancton em cada ponto de ensaio, ver fórmula (1).

Concentração média (PCs/m3) = número de colônias / volume de amostragem (1)

Exemplo 1: com um volume de amostragem de 400 L e um número de colônias de 1, então:

Concentração média = 1/0,4 = 2,5 unidades/m3

Exemplo 2: com um volume de amostragem de 2 m3 e um número de colônias de 3, então:

Concentração média = 3/2 = 1,5 unidades/m3

5.7 Avaliação dos resultados

5.7.1 A concentração média de planctone em cada ponto de ensaio deve ser inferior ao limite de concentração de bactérias nos critérios de avaliação escolhidos.

5.7.2 Em ensaios estáticos, se a concentração média de plancton em um determinado ponto de ensaio exceder os critérios de avaliação, a amostragem deve ser repetida duas vezes e os resultados de ambos os ensaios serão aprovados para ser considerado conforme.

5.8 Monitoramento diário

Para a monitorização do plancton, é aconselhável definir limites de desvio corretivo e limites de alerta para o fluxo de ar com velocidade do vento ao longo de uma linha de fluxo paralela em uma única direção e em seção vertical à direção do fluxo de ar, para garantir que a concentração de micróbios na câmara estéril seja controlada. A carga microbiana e a eficácia do desinfetante devem ser verificadas regularmente e não para análises de tendência. Monitoramento estático e dinâmico podem ser usados ​​com este método.

Para a frequência de amostragem do plancton, deve ser considerado que deve ser modificada se ocorrerem as seguintes circunstâncias, na avaliação das seguintes circunstâncias, também deve ser determinada a frequência de detecção de outros itens:

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

----------------- Tempo de parada prolongado do que previsto;

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

------------- Alterações no processo de desinfecção;

Poluição biológica, etc.;

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

---------------- Quando há mudanças significativas na distribuição regional da estrutura da câmara estéril.

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