Coluna de imunoafilidade da trombocitoxina M1

Instruções de funcionamento da coluna de imunoafilidade Total Aflatoxins M1

[Resumo]

A aflatoxina é um submetabólico produzido por fungos como a aflatoxina, a aflatoxina parasitária e outros fungos, classificada pela Organização Mundial da Saúde para Pesquisa sobre o Câncer como um cancerígeno de classe 1, e também é uma substância tóxica e altamente tóxica, amplamente presente em vários alimentos. Grãos como milho, amendoim, arroz, trigo e seus subprodutos são as principais fontes de trombocitoxina, enquanto a trombocitoxina B1 na ração, produzida após o metabolismo animal, ainda é altamente toxica e cancerígena e também está amplamente presente em alimentos como leite, sangue, tecidos e outros. A trombocitoxina é uma das três principais causas de câncer de fígado e também a principal causa de doenças como câncer de estômago e câncer intestinal, representando uma grande ameaça à saúde humana. Os países de todo o mundo têm restrições estritas sobre a trombocitoxina em alimentos e rações. A norma nacional de segurança de laticínios, que entrou em vigor em 1 de junho de 2010, regulamenta a detecção da trombocitoxina M1 em leite e produtos lácteos, e o principal método de pré-tratamento de amostras usado é o método de purificação da coluna de imunoafilidade.

[Aplicação e desempenho]

A nossa linha de produtos de teste de colunas imunológicas para fungotoxinas é uma coluna de imunoafilidade de alto desempenho projetada para limpar (purificar) ou concentrar amostras antes de realizar HPLC (Cromatografia Liquida de Alta Eficiência), GC-MS (Cromatografia de Gás - Espectrógrafo de Massa), ELISA (Determinação de Imunoadsorbente Enzimático).

Utilizado para a detecção qualitativa e quantitativa da tromicina M1 em leite, leite em pó, leite fermentado, queijo, creme e outras amostras, bem como para o pré-tratamento da amostra.

Capacidade da coluna: ≥100ng

Taxa de recuperação: ≥90%

[Princípio de Experimento]

A base para a determinação deste produto é a reação de anticorpos antígenos, anticorpos monoclonais de trombocitoxina M1 ligados ao gel dentro da coluna, a trombocitoxina M1 na amostra é extraída, filtrada, diluída e, em seguida, o líquido de extração da amostra é lentamente extraído pela coluna de análise de imunoafilidade de trombocitoxina M1, dentro da coluna de imunoafilidade, a toxina se liga ao anticorpo e, depois, a coluna de imunoafilidade é lavada para remover outras substâncias que não estão ligadas. Lave a metanol para a trombocitoxina M1 e injete-a no instrumento de análise para a detecção.

[Composição da embalagem]

Tracetoxina M1 padrão (opcional)

25 peças / caixa, 3 ml coluna / peças

Descrição do produto 1

[Equipamentos e reagentes necessários e não fornecidos]

Equipamento:

Homogenizadores de alta velocidade ou homogeneizadores de tecidos

Triturador

┅┅200mL/50mL medidor

Balança: 0,1 g

Acidômetro

Funil de divisão de líquidos

Pipeta de Traço: 100mL a 1000mL de canal único

Papel de filtro de ranura (papel de filtro qualitativo ou quantitativo dobrável rápido)

Funil de 50 ml

Evaporador rotativo

Tubo de teste de vidro descartável

Suporte de operação de fluxo de bomba (incluindo bombas de ar, seringas de vidro de diferentes volumes, etc.)

Copas, garrafas de capacidade, garrafas conicas, etc.

Reagentes:

Metanol (grau cromatográfico)

Acenitrilo (grau cromatográfico)

Éter de petróleo

Água destilada ou desionizada

Solução (0,5 mol / L) em peso de 2 g * dissolvido em 100 ml de água

[Etapas de processamento de amostras]

a) Leite

Aquecer 100 ml de banho de leite a 40 oC;

┅┅4000r / min centrífuga 15min, coleta 50mL de líquido claro para uso

(2) leite em pó e fórmulas para bebês e crianças em pó

Pese uma amostra de leite em pó de 10g, adicione uma pequena quantidade de água de 100mL a 50 oC várias vezes e agite para que o leite em pó se dissolva completamente.

┅┅6000r / min centrífuga 15min, coleta 50mL de líquido claro para uso

Pesar a amostra misturada de 60 g e ajustar o pH para 7,4 sob as instruções do acidômetro com uma solução de 0,5 mol / L *;

┅┅Diz homogenização com homogeneizador de alta velocidade a 9500 rpm 5 min

Banho aquecido a 40 oC;

┅┅4000r / min centrífuga 15min, coleta 50mL de líquido claro para uso

4) O queijo

A amostra de 5 g, misturada através de uma seta fina e circular de 10 olhos, é colocada em um tubo centrífugo de 50 ml, adicionando 2 ml de água e 30 ml de metanol;

┅┅Diga homogenização a 9500r / min com homogeneizador de alta velocidade para 5 min;

Extração por ultra-som 30 min;

┅┅Centrifugar a 6.000 r / min por 15 min, recolher o líquido líquido e mover-se para o funil de 250 mL.

Adicionar 30 ml de éter petrolífero (4.3) no funil de divisão e agitar por 2 min;

Depois da estratificação, mova a camada inferior em um copo de 50 ml e descarte a camada de éter de petróleo.

Repita a extração com éter de petróleo duas vezes.

Mova a solução inferior para um frasco de fundo redondo de 100 mL e concentre a pressão reduzida para cerca de 2 mL; Verta a concentração em um tubo centrífugo, o frasco é lavado duas vezes com solução de acetonitril-água (1 + 4) 5 mL, e o líquido de lavagem é vertido em um tubo centrífugo de 50 mL;

Adicione água para diluir até cerca de 50 mL, centrifuge a 6.000 rpm por 5 min e superimpose o líquido para purificação.

5) Creme

Pegue a amostra 5G e coloque-a em um copo de 50 ml;

Dissolve-o com 20 ml de éter petrolífero e mova-o em uma garrafa conica de 250 ml.

Adicione 20 ml de água e 30 ml de metanol, depois de oscilar por 30 min, mover todo o líquido para o funil de divisão;

Depois da estratificação, mover toda a camada inferior para um frasco de fundo redondo de 100 ml, concentrar a pressão reduzida em um evaporador rotativo para cerca de 5 ml e diluir com água para cerca de 50 ml para purificação.

[Passos de limpeza da coluna de afinidade]

Conecte a coluna de imunoafilidade sob uma seringa de vidro de 50,0 ml. Remover com precisão 50.0mL de líquido claro para injeção em uma seringa de vidro;

Conecte a bomba de pressão de ar com a seringa de vidro e ajuste a pressão para que a solução passe lentamente pela coluna de imunoafilidade a uma velocidade de fluxo de cerca de 2-3mL / min, até que 2 ~ 3mL de ar passe pela coluna;

Substitua a seringa de vidro de 10 ml conectada à coluna de afinidade, adicione 10 ml de água na seringa e ajuste a pressão para que a água limpe a coluna de afinidade a uma velocidade de fluxo de aproximadamente 6 ml / min.

Adicionar exatamente 4 mL de lavagem de acetitril de grau cromatográfico, a velocidade de fluxo é de 1 mL / min ~ 2 mL / min, coletar todo o líquido de lavagem no tubo de teste de vidro para uso de teste.

[Resultado do julgamento]

Após a purificação da coluna de imunoafilidade, a lavagem de acetonitril recolhida pode ser testada diretamente por fluorescência ou HPLC, ou por cromatografia de camada fina ou kits imunológicos ligados a enzimas. O teor de trombocitoxina em 4 ml de lavagem coletado é equivalente ao teor de trombocitoxina M1 em 50 ml de amostras de leite, amostras de leite fermentado ou amostras de leite em pó de 5 g, amostras de queijo e amostras de creme.

Se a detecção de HPLC necessitar de outro solvente, o nitrogênio líquido de lavagem de nitrílio pode ser secado por sopro e, em seguida, resolvido.

[Atenção]

A trombocitoxina é extremamente perigosa e deve ser usada com luvas.

Os recipientes de vidro usados ​​e a solução de tromicina é melhor mergulhar durante a noite com uma concentração de 5% de solução de hipoclorato de sódio.

Não use colunas de imunoafilidade com data de validade.

[Condições de armazenamento e período de conservação]

Condições de armazenamento: coluna de afinidade 2-8 ° C, não pode ser congelado.

Período de conservação: o produto é válido por 12 meses.