Reagentes biológicos

Um,Kit de teste de broncógenosCaracterísticas do produto:

(1) Só 1 μl de líquido de cultura celular e 1 panela de banho de água, não é necessário extrair DNA genômico, não é necessário microscópio de fluorescência, PCR, eletrofórese, imagem em gel, detector de bioluminescência e outros equipamentos experimentais complexos;

(2) apenas 1h para obter os resultados, simples, rápido e sensível método de detecção de brancos celulares;

(3) Apenas uma operação de um passo para concluir toda a experiência, os resultados experimentais de acordo com a mudança de cor do líquido reativo são intuitivamente fáceis de distinguir ao olho nu, sem a necessidade de eletroferese, para evitar o risco de falso positivo causado pela abertura da tampa de operação de múltiplas etapas;

(4) A sensibilidade é muito maior do que o método de PCR e é capaz de detectar vários brancos comuns em culturas celulares (brancos nasais suínos, brancos jinginos, brancos orais, brancos sem bilisteroides de Leicester, brancos fermentados, brancos de saliva, brancos humanos, brancos de pera, responsáveis ​​por 98% da poluição por brancos).

Dois.Kit de teste de broncógenosComposição (25T):

Passos experimentais:

(1) Preparação do líquido de cultura celular a testar

As células a testar são cultivadas durante 2-3 dias e a fusibilidade é melhor atingir mais de 80% quando o volume de cultura celular é superior a 200 μL, centrifugar por 5 minutos de acordo com 200 g e, em seguida, retirar o líquido líquido para o teste posterior (não extrair 50 μL de cultura no fundo do tubo e a precipitação celular);

(2) Preparação do sistema de reação (primeiro colocar a solução A, a solução B, o controle positivo, o óleo de parafina imediatamente após o descongelamento e derretimento no gelo)

Retire a solução A a partir de -20 ° C e misture suavemente para cima e para baixo após o descongelamento e derretimento. Prepare o seguinte sistema de reação em um microcentrífugo de acordo com o número de amostras de células a testar (o processo de preparação do sistema de reação é muito importante no gelo);

Nota: cada experimento requer um controle negativo, um controle positivo e devido à presença de erros de pipeta, a detecção de N amostras geralmente recomenda a formulação de N + 3 sistemas de reação acima.

Misturar suavemente com um oscilador e, em seguida, dividir em um tubo de PCR (recomenda-se o uso de um tubo de PCR de volume de 200 μl), dividindo 24 μl do líquido de reação após a mistura acima em cada tubo;

(3) amostra superior (é muito importante manter todo o processo de amostra superior no gelo, especialmente o óleo de parafina coberto acima do líquido de reação precisa ser pré-refrigerado no gelo)

Amostra a ser testada: adicionar 1 μl de líquido de cultura a ser testada ao tubo de reação após centrifugação e, em seguida, mover suavemente para cima e para baixo com esta pistola de adição de líquido e bater 5 vezes;

Controle negativo: não adicionar nenhuma amostra ou adicionar 1 μl de água estéril;

Controle positivo: adicione 1 μl de amostra de controle positivo e, em seguida, use esta pistola de adição para mover suavemente para cima e para baixo e bater 5 vezes;

Em seguida, acrescente suavemente 25 μl de óleo de parafina acima de cada solução de tubo de reação (reagir na panela de banho de água) para evitar que a evaporação do líquido leve a resultados imprecisos. Ao adicionar óleo de parafina, observe a substituição da cabeça de arma a cada vez para evitar a contaminação cruzada entre as amostras. Se a reação for realizada em um instrumento de PCR, não é necessário adicionar óleo de parafina.

4) Reação

Ajuste a temperatura do banheiro de água ou do PCR para 61 ° C, coloque no tubo de reação e incube por 60 min;

Observação:

A temperatura real da panela de banho de água pode estar um pouco desviada da temperatura de configuração, recomenda-se primeiro a calibração com o termômetro. Na verdade, as reações de 59 a 63 ° C podem ser realizadas, mas afetam a sensibilidade da detecção;

2O produto da reação não pode ser aberto, caso contrário, o aerossóil produzido levará à detecção posterior de falsos positivos. Recomenda-se que os tubos de reação sejam enrolados em sacos de plástico ou luvas, descartados em um lixo especial e limpos oportunamente;

Não é recomendado o uso de forno ou banho metálico para a reação de aquecimento;

5) Resultado do julgamento

Após 60 min de reação a 61 ℃, retirar imediatamente o tubo de reação e colocar a temperatura ambiente. Observar os resultados da reação em ambientes bem iluminados (recomendado papel branco como fundo). Se o líquido de reação ainda é azul-roxo, é considerado negativo; Se o líquido de reação for azul céu, é considerado positivo.

IV. Literatura relacionada

1, ShiyuHe, YanzhiHuang, YanlingZhao. AReverseTranscription-PolymeraseSpiralReaction(RT-PSR)-BasedRapidCoxsackievirusA16DetectionMethodandItsApplicationintheClinicalDiagnosisofHand,Foot,andMouthDisease. FronteirasMicrobiologia.2020; 12(11):734-743.

2、 AudreyJean, FlorenceTardy, OmranAllatif. Avaliação da contaminação de micoplasma de culturas celulares por PCRusi por meio de um par de primeiros de satofuniversais que atingem fragmentos de 1,5 kb de genes de ARN16 Srs. PLOSONE.2017; 12(2):e0172358.

3、ZohreSoheily, MohammadSoleimani, KeivanMajidzadeh-Ardebili. Detecção de Contaminação de Micoplasma de Cultura Celular por Método de Amplificação Isotérmica Mediada por Loop. CellJ.2019; 21(1):43-48.

4, XinXu, XueyuWang, WenHu. Um teste de reação espiral de ligação cruzada de polimerase melhorado para diagnóstico rápido de parvovírus canino2 infecção. FronteirasCiência Veterinária.2020; 7(57):1629-1636.