Kit de teste ELISA

Instruções de uso do kit de teste antibiótico da enzima do vírus da língua azul

Princípio de teste

Esta caixa é composta de marcadores enzimáticos, marcadores enzimáticos e outros reagentes de acompanhamento pré-embalados pelo antígeno do vírus da língua azul, adicionando soro de controle e amostras para teste na placa enzimática durante o experimento, se a amostra contém anticorpos do vírus da língua azul após a temperatura, será ligada ao antígeno na placa enzimática, após a lavagem para remover os outros componentes não ligados; Adicionar marcadores enzimáticos para se ligar específicamente ao complexo de anticorpos antígenos na placa enzimática; Depois de lavar, remover o marcador enzimático não ligado, adicionar o substato TMB no orifício, reagir com o composto marcado enzimático para formar um produto azul, a clareza da cor é positivamente associada ao conteúdo de anticorpos específicos na amostra; Após a adição do líquido terminante para terminar a reação, o produto se torna amarelo; Usando um calibrador enzimático para medir os valores de absorção de luz em cada orifício de reação em comprimentos de onda de 450 nm, você pode saber se a amostra contém anticorpos contra o vírus da língua azul.

Composição do Kit

Armazenamento e validade

Conservar a 2 a 8 ° C, com validade de 12 meses.

Depois de o pacote ser aberto pela placa, guarde-o em 2 a 8 ° C para evitar a umidade. O prazo de utilização é de 2 meses.

Aplicação de instrumentos

Calibrador enzimático com comprimento de onda de 450 nm, dispositivo de termostato de 37 ° C, pipeta de traço ajustável.

Preparação da amostra

Prepare o soro de sangue inteiro animal de acordo com os métodos convencionais, exigindo que o soro seja limpo, sem sangue solúvel e sem poluição. As amostras podem ser conservadas a 2 a 8 ° C durante 1 semana e devem ser conservadas a -20 ° C a longo prazo.

O líquido de lavagem concentrado deve ser restaurado a temperatura ambiente para que o precipitado se dissolva antes de ser usado, em seguida, diluído 20 vezes com água destilada ou água desionizada para o líquido de lavagem de trabalho (por exemplo, 19 partes de água destilada ou água desionizada mais 1 parte de líquido de lavagem concentrado).

Método de teste

1. Coloque a caixa de reagente em temperatura ambiente por 30 minutos antes de usar e retorne à temperatura ambiente.

2. Tome a quantidade necessária de placa de marcação enzimática, coloque o controle negativo e positivo em cada um dos buracos, a placa não usada seja selada o mais rápido possível e mantida a 2 a 8 ° C.

3. adicione primeiro a amostra de 5ul para inspeção no furo da amostra e adicione o líquido de diluição da amostra de 95ul para oscilar completamente.

Os orifícios de controle negativo e positivo adicionam 100 μl de controle negativo e positivo, respectivamente.

5. misturar, cobrir a membrana de cobertura e incubar no aquecedor de 37 ° C por 30 minutos.

6. Eliminar o líquido dentro do buraco, cada buraco adicionar 250ul de líquido de lavagem de trabalho, lavar com uma mistura de choque 60 segundos depois de descartar, repetir a lavagem 5 vezes, * depois de secar o líquido.

7. 100 μl de marcador de enzyma por poço, colocar a reação de proteção contra a luz a 37 ° C por 30 minutos.

8. Eliminar o líquido dentro do buraco, cada buraco adicionar 250ul de líquido de lavagem de trabalho, lavar com uma mistura de choque 60 segundos depois de descartar, repetir a lavagem 5 vezes, * uma vez depois de secar o líquido.

De acordo com o número de amostras, o líquido de colorização A e o líquido de colorização B são misturados e configurados como líquido de trabalho de substância em proporção de volume equivalente. Cada orifício adiciona 100ul, colocar a reação de proteção contra a luz de 37 ° C por 10 minutos, se houver uma velocidade de exibição de cor global muito rápida, você pode terminar a exibição de cor com 5 minutos de antecedência, o tempo de exibição de cor * não excede 15 minutos.

Adicione 100 μl de líquido final a cada orifício, misture e determine o valor de absorção de luz (OD) de cada orifício a 450 nm.

Valor de referência

Em condições normais do experimento, controle positivo OD - controle negativo OD > 0,2.

Interpretação dos resultados do teste

S / P = (amostra OD - OD de controle negativo) / (OD de controle positivo - OD de controle negativo).

Os resultados são interpretados como positivos quando o S/P ≥ 0,4.

Os resultados de 0,2 <S/P <0,4 levam em consideração a possibilidade de insuficiência de anticorpos ou suspeita de infecção.

Quando o S/P é inferior a 0,2, o resultado é interpretado como negativo.

Limitações do método de teste

Este kit serve apenas como uma avaliação aproximada dos anticorpos do vírus da língua azul em amostras de teste qualitativo.

Este kit é somente para uso em pesquisa e não deve ser usado em ensaios clínicos ou em seres humanos.

Precauções

A operação experimental precisa usar luvas, roupa de trabalho, rigorosamente saudável e executar o sistema de isolamento de desinfecção, todos os tipos de resíduos experimentais devem ser tratados de acordo com os infecciosos.

O líquido de terminação é corrosivo, deve evitar o contato com a pele e roupas, por favor, enxague imediatamente com uma grande quantidade de água da torneira.

A placa de marcação enzimática deve ser retirada do ambiente refrigerado e restaurada à temperatura ambiente para abrir o saco, e a placa de marcação enzimática não utilizada deve ser colocada em um saco selado com secador.

O líquido de lavagem concentrado é fácil de cristalizar em baixa temperatura e deve ser restaurado à temperatura ambiente para ser dissolvido quando usado.

As amostras usadas para o teste devem ser mantidas frescas.

Os resultados do ensaio devem ser determinados com base nas leituras enzimáticas.

Componentes de reagentes diferentes não devem ser misturados.