Marca de células epiteliais vesículas humanas tipo II

Células epiteliais

Propriedades básicas das células

Médio de cultura: FBS, aditivos de crescimento, penicilina, estreptomicina, etc.

Frequência de troca: a cada 2-3 dias

Características de transmissão: 2-3 gerações

Liquido digestivo: 0,25% de pancreatase

Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2，5%

Perfil celular: as células epiteliais do tubo pulmonar são separadas do tecido do tubo pulmonar; Trachea, parte dos órgãos respiratórios; Tubo cilindrico para parede traseira ligeiramente plana. A borda inferior da sexta vertebra cervical plana da extremidade superior, ligada à cartilagem anel; Baixar até a intersecção do quarto e quinto torso (equivalente ao plano do canto torácico), dividindo o bronco principal esquerdo e direito, a bifurcação é chamada de bronco respiratório. O tubo é composto principalmente de 14-16 cartilagens semi-anelares, com elasticidade, a cartilagem é um anel cartilaginoso em forma de "C", a abertura é para trás, cada anel cartilaginoso é ligado a ligamentos, a abertura posterior do anel é ligada por músculos lisos e tecido conjuntivo denso, mantendo um estado aberto contínuo. O tubo é revestido com uma membrana mucosa, a superfície cobre o epitêlio fibroso, o muco secretado pela membrana mucosa pode aderir às partículas de poeira inaladas no ar, e o fibroso oscila constantemente para a garganta para expulsar o muco e a poeira para purificar o gás inalado. O epitelio das vias respiratórias é a primeira linha de defesa no contato com o ambiente externo, não apenas como célula alvo de vários patógenos e meios inflamatórios, mas também como efeito na síntese celular, liberação de vários meios inflamatórios e citofatores que participam da inflamação das vias respiratórias e da resposta imunológica. As epitelicinas aeroscópicas primitivas cultivadas in vitro têm grandes semelhanças em atividade morfológica e funcional com os tecidos in vivo e, portanto, são extremamente importantes em estudos básicos e clínicos.

Ideias de cultura de separação de células primordiais:

Extração - Separação - Cultura - Identificação

Primeiro, o tecido é retirado do organismo, disperso em células individuais após o tratamento com albinase / colágenase pancástica, e depois cultivado em meios apropriados para permitir que as células se reproduzam até um determinado fator para a identificação celular.

Passos experimentais:

1, tomar 7-10d ratos machos SD, deslocar a vertebra cervical para a morte, imersão em 75% de etanol para a desinfecção 3-5min.

Em segundo lugar, na mesa de trabalho ultra-limpa, coloque a cabeça do rato em um prato de petri de vidro, depois de abrir a cavidade craniana, retire todo o cérebro e coloque-o em um prato de petri de vidro pré-frio com PBS para remover o cerebelo e o encefalo.

Role lentamente o hemisfério do cérebro sobre papel de filtro seco para remover a meninge macia e os vasos sanguíneos cerebrais e coloque-o em um novo prato de vidro de petri pré-refrigerado com PBS.

Remova a matéria branca do cérebro, vasos sanguíneos grandes residuais e a meninge mole com uma amputação fina para manter a córtex cerebral.

A córtex cerebral é colocada em DMEM, cortada em cerca de 1 mm3 de tamanho, colocada em um tubo centrífugo de 50 ml, adicionada à mistura de líquido I (0,05-0,1% de colágenase tipo II, 0,025-0,05% de colágenase tipo IV, 200-400U DNaseI), após a mistura de 37 ° C banho de água para digerir 1-1,5 h.

6, temperatura ambiente 1 000 x g centrífuga 8 min, ir para o líquido limpo.

Adicione 20% de BSA pesada em suspensão no precipitado, misture completamente, 1 000 x g, 20 min, centrifugação a 4 ° C, vá para a limpeza superior.

8, precipitação adicionar 4ml de líquido de hibrase II (0,05-0,1% de colagenase / dispersase, 0,05-0,1% de colagenase tipo I, 100-300U DNaseI) em suspensão pesada, misturar, 37 ° C banho de água digerir 0,5-1h, 700 x g temperatura ambiente centrifugação 6min, ir para o líquido limpo.

Depositação adicionar 2 ml de suspensão de cultura DMEM e misturar, colocado em 12 ml de 50% Percoll (25 000 x g, 60 min, 4 ° C), 1000 x g, 4 ° C para a formação de gradiente contínuo por centrifugação 10 min.

A camada branca amarela acima da camada de glóbulos vermelhos perto da parte inferior é o segmento microvascular purificado, depois de aspirar o DMEM e lavar duas vezes (centrífuga 1000 x rpm, 6 min, temperatura ambiente), para o líquido limpo.

Adicione a solução de cultura DMEM (20% FBS, 4ug / ml de substância) em ressuspensão, vacina em um prato de cultura celular preparado por incubação durante a noite com 5% de soro de ratos a 37 ° C, coloca-o em um compartimento de cultura de 5% de CO2 a 37 ° C para substituir o meio misturado sem substância após 24 horas de incubação e troca no dia seguinte.

Atenção:

A cultura pode ser conservada por 3-6 meses sob condições de 4 ° C.

Durante a cultura celular, observe manter a operação estéril.

Durante o processo de cultura de transmissão, o tempo de digestão da enzima yi não deve ser muito longo, caso contrário, afetará a parede celular e seu estado de crescimento.

Recomenda-se que o cliente tire algumas fotos das células em cada multiplicador nos primeiros 3 dias após o recebimento das células, para registrar o estado das células e facilitar a comunicação com o departamento técnico; Por causa do transporte, as células sensíveis individuais podem ser instáveis, por favor, entre em contato conosco prontamente para informar detalhadamente sobre a situação específica das células, para que nossos técnicos possam rastrear e voltar até que o problema seja resolvido.

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