Kit de teste de vírus em forma de copo de gato

Kit de teste de vírus em forma de copo de gatoEspecificações da embalagem: 25T / caixa e 50T / caixa

[Princípio de teste]

Kit de teste de vírus em forma de copo de gatoEste kit é projetado para o gene específico e uma sonda de sinalizador molecular que permite a reação de PCR e a liberação de sinais fluorescentes quando a amostra contém esse DNA. Monitoramento e saída em tempo real do sinal de fluorescência correspondente durante o processo de PCR com o instrumento para a análise qualitativa dos resultados do teste.

[Condições de armazenamento e prazo de validade] para evitar a luz abaixo de -20 ° C, para evitar o congelamento repetido, período de validade de 12 meses.

【Instrumentos aplicáveis】 Série ABI, Série Bio-Rad, Série Agilent Stratagene MX, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Série Rotor-Gene, Série Hangzhou Bogie e outros PCR quantitativo de fluorescência em tempo real multicanal.

[Requisitos de amostra]

1. Se a amostra original for usada para o teste. As amostras (líquido cerebrospinal, sangue venoso, líquido articular do paciente; sangue venoso de animais doentes, leite; colônias, fungos, etc.) devem ser recolhidas e usadas ​​como amostras originais em suspensão de água esterilizada dupla ou salina fisiológica para esterilização.

Se o teste de PCR for necessário após a esterilização, a amostra original deve ser esterilizada com esterilizador seletivo.

Se a amostra não for detectada imediatamente após a coleta, pode ser colocada em refrigeração de 2 a 8 ° C durante a noite; Para conservação a longo prazo, as espécimes devem ser congeladas a -20 ° C a -80 ° C.

[Método de teste]

Preparação do Reagente (Área de Preparação do Reagente)

(1) retirar a caixa do frigorífico, remover o reagente necessário para o experimento da caixa, derreter completamente, misturar e instantaneamente centrifugar para remover o líquido ligado à parede do tubo.

(2) Contabilizar o número de reações necessárias para o experimento (n) e calcular as doses necessárias para o experimento de acordo com o sistema de reações mostrado na tabela abaixo.

n = número de controles negativos (1T) + número de controles positivos (1T) + retenção de erro (1T) + número de amostras

(3) Adicione o reagente acima em um tubo de centrifugação estéril e centrifuge instantaneamente depois de misturar completamente. O reagente é dividido no tubo de reação de PCR de acordo com a quantidade de 20 μL / tubo.

(4) Transferir o tubo de reação de PCR para a área de tratamento da amostra depois de tapar a tampa da reação de PCR. O reagente restante é colocado de volta para congelação no frigorífico abaixo de -20 ℃.

Preparação da amostra (área de processamento da amostra)

Para extrair o ácido nucleico com um kit de extração de DNA/RNA, siga as instruções do kit.

3. Adição de amostras

No tubo de reação de PCR preparado acima, adicione 5 μl de DNA da amostra a ser testada tratada e 25 μl de volume final por tubo, cubra a tampa de reação de PCR depois de misturar e transferir para o instrumento de PCR. O controle negativo e o controle positivo são adicionados ao controle negativo ou ao controle positivo fornecido com a caixa de 5 μL, com um volume final de 25 μL / tubo, e a tampa de reação de PCR é tapada após a mistura com centrifugação instantânea de baixa velocidade e transferida para o instrumento de PCR.

PCR (área de amplificação de PCR)

(1) Tome o tubo de reação de PCR preparado para a área de tratamento da amostra, coloque-o na posição correspondente do compartimento de amostra do PCR quantitativo de fluorescência em tempo real e registre a ordem de colocação.

(2) Defina os parâmetros relacionados à amplificação de ácido nucleico do instrumento para amplificação de PCR de acordo com a tabela abaixo.

NOTA: A série ABI de PCR fluorescente não seleciona a correção ROX no momento da configuração, configurando o grupo de extinção selecionando Nenhum.

[Valor de referência (âmbito de referência)]

Determinação da eficácia do kit:

(1) Controle positivo: curva típica de amplificação tipo S ou valor de Ct ≤ 35.

(2) Controle negativo: valor de Ct > 38 ou nenhum valor de Ct, a linha é reta ou ligeiramente inclinada, sem período de crescimento exponencial.

Os resultados da amostra determinam:

(1) Positivo: o resultado do teste da amostra tem um valor de Ct ≤ 35 ou um período de crescimento exponencial evidente.

(2) Duvidoso: o valor Ct da amostra está no intervalo de 35 a 38. Neste momento, a amostra deve ser testada repetidamente, se o resultado do experimento repetido ainda estiver no intervalo de 35 a 38, com um período de crescimento exponencial evidente, será considerado positivo ou negativo.

(3) Negativo: o resultado do teste da amostra tem um valor de Ct > 38 ou nenhum valor de Ct.

[Explicação dos resultados do teste]

[Limitações do método de teste]

1. Os resultados falsos negativos podem ocorrer quando as concentrações de ácido nucleico em amostras de teste são inferiores às do kit.

As amostras testadas são manipuladas de forma inadequada durante a coleta, o transporte, o armazenamento e o processamento, o que pode causar a degradação do DNA e resultados falsos negativos.

A contaminação cruzada das amostras durante a coleta, o transporte, o armazenamento e o processamento pode resultar em resultados falsamente positivos.

O limite de detecção do produto é de 103 cópias/mL, valor CV do produto ≤ 3%.

[Atenção]

1. Os laboratórios que utilizam este kit devem ser administrados de acordo com as normas de gestão de laboratórios de teste de amplificação genética relevantes promulgadas pelas partes relevantes do Estado;

Para evitar a degradação do RNA, o processamento da amostra deve ser operado em condições de 0-4 ° C e testado imediatamente após a conclusão do experimento; Os materiais consumíveis dos aparelhos utilizados durante o processamento das amostras devem ser tratados sem nuclease;

Os artigos regionais são exclusivos e não podem ser usados ​​cruzadamente para evitar a poluição; Após o teste, a mesa de trabalho deve ser limpa imediatamente;

Quando o líquido de reação é absorvido, deve-se tentar evitar a produção de bolhas; Antes do aparelho de PCR, deve-se prestar atenção para verificar se os tubos de reação estão fechados para evitar que a evaporação do líquido cause resultados imprecisos;

Todos os reagentes do kit devem ser completamente fundidos e misturados a temperatura normal antes de serem usados e devem ser instantaneamente centrifugados;

Todos os controles negativos e positivos incluídos no kit devem ser transferidos para a área de preparação da amostra e armazenados separadamente antes da primeira utilização;

Para evitar interferências de fluorescência, o contato direto com a mão nua do tubo de reação de PCR deve ser evitado e qualquer marcação no tubo de reação de PCR deve ser evitada;

8. a cabeça de aspiração usada durante o processo de teste deve ser atingida diretamente no cilindro de resíduos contendo ácido hipoclorado de 10%, o tubo de reação de PCR terminado de teste, a tampa aberta e descartada após a esterilização com outros artigos de resíduos; Mesas de trabalho e vários equipamentos de laboratório devem ser desinfetados regularmente com 10% de ácido hipoclorado, 75% de álcool ou luz ultravioleta;

Os parâmetros relacionados à amplificação do instrumento devem ser definidos de acordo com os requisitos relevantes desta instrução; Reagentes diferentes não podem ser misturados; e utilização durante o período de validade. Os produtos são usados apenas para pesquisa científica.