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Endereço
Nova área de Pudong, Xangai
Categorias do produto
Xangai Beibo Biotecnologia Co., Ltd.
Kit de extração de proteína total Características Precauções
NegociávelAtualização em05/06
- Modelo
- Natureza do fabricante
- Produtores
- Categoria do produto
- Local de origem
Visão geral
O kit de extração de proteínas totais contém uma fórmula que dissolve eficazmente os componentes da membrana celular, incluindo a membrana citoplasmática, a membrana nuclear e várias membranas de órgãos celulares. Esta caixa contém uma mistura de inibidores de proteases que impede a degradação das proteínas pelas proteases e garante a extração de proteínas de alta pureza.
Detalhes do produto
Temperatura de armazenamento2-8℃
Kit de extração de proteína totalPrecauções
Os inibidores de protease também podem ser armazenados a 2-8 ° C antes de serem usados sem tampa aberta. Armazenar a -20 ° C após a abertura da tampa.
O inibidor de protease é um estado sólido a baixa temperatura de 2-8 ° C, depois de ser retirado do frigorífico e restaurado a temperatura ambiente ou banho de água de curto período de 37 ° C, tornando-se um estado líquido depois de centrifugar para o fundo do tubo e abrir a tampa.
3. Por favor, use o reagente o mais rápido possível após o desmantelamento!
O inibidor de protease é um estado sólido a baixa temperatura de 2-8 ° C, depois de ser retirado do frigorífico e restaurado a temperatura ambiente ou banho de água de curto período de 37 ° C, tornando-se um estado líquido depois de centrifugar para o fundo do tubo e abrir a tampa.
3. Por favor, use o reagente o mais rápido possível após o desmantelamento!
validade
Um ano.
Método de teste
WB, IP, co-IP, ELISA, EMSA 等
amostra aplicável
Células/tecidos animais
Kit de extração de proteína totalCaracterísticas do produto
Fácil de usar, extração de proteínas das células e tecidos não requer moagem, congelamento repetido, ultra-som quebrado e outros pré-tratamento.
O processo de extração é simples e conveniente, reduzindo o tempo de extração de proteínas para 30 minutos - 1 hora.
3. contém estabilizador de proteína, a proteína extraída é estável.
Quando a concentração de proteína ultravioleta é detectada, a interferência de fundo é baixa.
O líquido de extração de proteína total contém uma variedade de ingredientes ativos, que podem liberar completamente a proteína do citoplasma, a nucleoproteína e a proteína da membrana, e podem combinar a proteína liberada para evitar a precipitação.
Os inibidores da protease inibem a degradação das proteínas e a fórmula do inibidor da protease é otimizada. A mistura de inibidores de protease contém seis inibidores independentes de protease AEBSF, Aprotinina, Leupeptina, Pepstatina A, Bestatina, E-64, cada um inibindo especificamente a atividade de uma ou mais proteases. A composição otimizada da mistura permite que ela iniba quase todas as atividades proteases importantes, incluindo proteases, semiproteases, aspartic proteases, alanina-aminopeptidases e muito mais.
O processo de extração é simples e conveniente, reduzindo o tempo de extração de proteínas para 30 minutos - 1 hora.
3. contém estabilizador de proteína, a proteína extraída é estável.
Quando a concentração de proteína ultravioleta é detectada, a interferência de fundo é baixa.
O líquido de extração de proteína total contém uma variedade de ingredientes ativos, que podem liberar completamente a proteína do citoplasma, a nucleoproteína e a proteína da membrana, e podem combinar a proteína liberada para evitar a precipitação.
Os inibidores da protease inibem a degradação das proteínas e a fórmula do inibidor da protease é otimizada. A mistura de inibidores de protease contém seis inibidores independentes de protease AEBSF, Aprotinina, Leupeptina, Pepstatina A, Bestatina, E-64, cada um inibindo especificamente a atividade de uma ou mais proteases. A composição otimizada da mistura permite que ela iniba quase todas as atividades proteases importantes, incluindo proteases, semiproteases, aspartic proteases, alanina-aminopeptidases e muito mais.
Aplicações do produto
WB, IP, co-IP, ELISA, EMSA 等
Preparação do instrumento
1. Centrífuga
2. Oscilladores
3. homogenizador / homogenizador
4. misturador turbulento
5. Pipeta
6. Frigorífico
7. caixa de gelo
2. Oscilladores
3. homogenizador / homogenizador
4. misturador turbulento
5. Pipeta
6. Frigorífico
7. caixa de gelo
Preparação do Reagente
1. tampão PBS
2. Kit de quantificação de proteínas
2. Kit de quantificação de proteínas
Preparação de Consumíveis
1. Tubo centrífugo
2. Sucção da cabeça
3. Luvas de uso único
2. Sucção da cabeça
3. Luvas de uso único
Precauções de uso
O reagente do tubo de centrifugação do capucho giratório deve ser centrifugado brevemente antes de abrir a tampa, jogando o líquido na parede interna da tampa para o fundo do tubo para evitar que o líquido caia quando a tampa é aberta.
O inibidor de protease está em estado sólido a 2-8 ° C, depois de ser retirado do frigorífico, é restaurado a temperatura ambiente ou banho de água por um curto período de 37 ° C, tornando-se líquido depois de centrifugar para o fundo do tubo e abrir a tampa.
Todos os reagentes no processo experimental devem ser pré-refrigerados; Todos os aparelhos devem ser colocados no frigorífico de -20 ° C para pré-refrigeração. A amostra deve ser mantida a baixa temperatura durante todo o processo.
Se a solução aparecer durante o armazenamento de inibidores de protease, não afeta o uso, uso normal após a dissolução.
Se o kit não for usado em um curto período de tempo, a mistura de inibidores de protease não pode ser adicionada ao extrato de uma só vez.
Outros inibidores de protease podem ser adicionados de acordo com a necessidade de seus próprios experimentos.
Experimento downstream, se for um teste de atividade enzimática de protease ou fosfatase específica, o líquido de extração pode ser eliminado sem inibidores de protease ou inibidores de fosfatase, atenção ao processo de extração para manter a operação a baixa temperatura e reduzir o tempo de centrifugação.
O Western Blot pode ser usado com beta-actina, GAPDH e tubulina.
A velocidade de rotação da centrífuga tem duas formas de representação da força de centrífuga relativa (RCF, x g) e da velocidade de rotação por minuto (RPM, r / min), algumas configurações da centrífuga têm uma comutação de exibição de RPM e x g, mas algumas centrífugas não têm função de comutação automática. A conversão é necessária usando a seguinte fórmula: g = r × 1,118 × 10-5 × rpm2 (r é o raio de centrífuga eficaz, ou seja, o comprimento do eixo da centrífuga até a posição central do fundo do tubo de coleta centrífuga, em centímetros) Por exemplo: a velocidade de rotação é de 3000 rpm e o raio de centrífuga eficaz é de 10 cm, então a força de centrífuga relativa (RCF, ×g) = 10 × 1,118 × 10-5 × 30002 = 1006,2 (×g).
O inibidor de protease está em estado sólido a 2-8 ° C, depois de ser retirado do frigorífico, é restaurado a temperatura ambiente ou banho de água por um curto período de 37 ° C, tornando-se líquido depois de centrifugar para o fundo do tubo e abrir a tampa.
Todos os reagentes no processo experimental devem ser pré-refrigerados; Todos os aparelhos devem ser colocados no frigorífico de -20 ° C para pré-refrigeração. A amostra deve ser mantida a baixa temperatura durante todo o processo.
Se a solução aparecer durante o armazenamento de inibidores de protease, não afeta o uso, uso normal após a dissolução.
Se o kit não for usado em um curto período de tempo, a mistura de inibidores de protease não pode ser adicionada ao extrato de uma só vez.
Outros inibidores de protease podem ser adicionados de acordo com a necessidade de seus próprios experimentos.
Experimento downstream, se for um teste de atividade enzimática de protease ou fosfatase específica, o líquido de extração pode ser eliminado sem inibidores de protease ou inibidores de fosfatase, atenção ao processo de extração para manter a operação a baixa temperatura e reduzir o tempo de centrifugação.
O Western Blot pode ser usado com beta-actina, GAPDH e tubulina.
A velocidade de rotação da centrífuga tem duas formas de representação da força de centrífuga relativa (RCF, x g) e da velocidade de rotação por minuto (RPM, r / min), algumas configurações da centrífuga têm uma comutação de exibição de RPM e x g, mas algumas centrífugas não têm função de comutação automática. A conversão é necessária usando a seguinte fórmula: g = r × 1,118 × 10-5 × rpm2 (r é o raio de centrífuga eficaz, ou seja, o comprimento do eixo da centrífuga até a posição central do fundo do tubo de coleta centrífuga, em centímetros) Por exemplo: a velocidade de rotação é de 3000 rpm e o raio de centrífuga eficaz é de 10 cm, então a força de centrífuga relativa (RCF, ×g) = 10 × 1,118 × 10-5 × 30002 = 1006,2 (×g).
Uso
Extração total de proteína de amostra celular:
Extração de proteínas celulares suspensas:
1. Preparação do líquido de extração:
Adicione 2 μl de mistura de inibidores de protease e 2 μl de mistura de inibidores de fosfatase a cada 500 μl de extração de proteína total fria, misturada no gelo de reposição posterior.
2. Tome 5 x 106 células, centrifugar em 4 ° C, 2500 x g condições por 5 minutos, cuidadosamente absorver o meio de cultura, secar o máximo possível, coletar as células.
Lave as células duas vezes com PBS frio e, após cada lavagem, seque o máximo possível.
Adicione 500 μl de extrato de proteína total frio a cada 5 x 106 -1 x 107 células (aproximadamente 50 mg de células / 50 μl de volume de precipitação celular), depois de soprar e misturar, oscile a 4 ° C por 20-30 minutos até que as células se desintegram completamente sem precipitação celular óbvia.
Centrífuga durante 15 minutos em condições de 4 ° C, 12.000 x g.
Inhale o serum superior em outro tubo centrífugo limpo pré-refrigerado para obter a proteína total.
Depois de quantificar o extrato de proteína acima, divide-o em um frigorífico de -80 ° C para conservar em reposição ou para uso direto em experimentos a jusante.
Extração de proteínas celulares:
1. Preparação do líquido de extração:
Adicione 2 μl de mistura de inibidores de protease e 2 μl de mistura de inibidores de fosfatase a cada 500 μl de extração de proteína total fria, misturada no gelo de reposição posterior.
2. cuidadosamente absorver o líquido de cultura das células de parede.
Lave as células duas vezes com PBS frio e seque o PBS o máximo possível após cada lavagem.
Adicione uma quantidade moderada de extrato de proteína total frio, oscile por 15-30 minutos até que as células se desintegram completamente, raspe novamente com uma lâmina de raspagem celular e inale o desintegrado em outro tubo centrífugo limpo.
Centrifugar durante 15 minutos em condições de 4 ° C, 12.000 x g.
Inhale o serum superior em outro tubo centrífugo limpo pré-refrigerado para obter a proteína total.
Depois de quantificar o extrato de proteína acima, divide-o em um frigorífico de -80 ° C para conservar em reposição ou para uso direto em experimentos a jusante.
Extração total de proteína de amostra de tecido:
1. Preparação do líquido de extração:
Adicione 2 μl de mistura de inibidores de protease e 2 μl de mistura de inibidores de fosfatase a cada 500 μl de extração de proteína total fria, misturada no gelo de reposição posterior.
2. Tome 50-100 mg de amostra de tecido, lave-a com PBS e, em seguida, corte-a com uma faca o máximo possível, adicione 500 μl de extrato de proteína total e amortigue-a com um amortiguador de tecido / amortiguador até que não haja sólidos visíveis ao olho nu.
3. Inhale a homologação do tecido em um tubo centrífugo limpo pré-refrigerado e oscile por 10-20 minutos a 4 ° C.
Centrífuga durante 15 minutos em condições de 4 ° C, 10.000-14.000 × g.
Inhale o serum superior em outro tubo centrífugo limpo pré-refrigerado para obter a proteína total.
Depois de quantificar o extrato de proteína acima, divide-o em um frigorífico de -80 ° C para conservar em reposição ou para uso direto em experimentos a jusante.
Extração de proteínas celulares suspensas:
1. Preparação do líquido de extração:
Adicione 2 μl de mistura de inibidores de protease e 2 μl de mistura de inibidores de fosfatase a cada 500 μl de extração de proteína total fria, misturada no gelo de reposição posterior.
2. Tome 5 x 106 células, centrifugar em 4 ° C, 2500 x g condições por 5 minutos, cuidadosamente absorver o meio de cultura, secar o máximo possível, coletar as células.
Lave as células duas vezes com PBS frio e, após cada lavagem, seque o máximo possível.
Adicione 500 μl de extrato de proteína total frio a cada 5 x 106 -1 x 107 células (aproximadamente 50 mg de células / 50 μl de volume de precipitação celular), depois de soprar e misturar, oscile a 4 ° C por 20-30 minutos até que as células se desintegram completamente sem precipitação celular óbvia.
Centrífuga durante 15 minutos em condições de 4 ° C, 12.000 x g.
Inhale o serum superior em outro tubo centrífugo limpo pré-refrigerado para obter a proteína total.
Depois de quantificar o extrato de proteína acima, divide-o em um frigorífico de -80 ° C para conservar em reposição ou para uso direto em experimentos a jusante.
Extração de proteínas celulares:
1. Preparação do líquido de extração:
Adicione 2 μl de mistura de inibidores de protease e 2 μl de mistura de inibidores de fosfatase a cada 500 μl de extração de proteína total fria, misturada no gelo de reposição posterior.
2. cuidadosamente absorver o líquido de cultura das células de parede.
Lave as células duas vezes com PBS frio e seque o PBS o máximo possível após cada lavagem.
Adicione uma quantidade moderada de extrato de proteína total frio, oscile por 15-30 minutos até que as células se desintegram completamente, raspe novamente com uma lâmina de raspagem celular e inale o desintegrado em outro tubo centrífugo limpo.
Centrifugar durante 15 minutos em condições de 4 ° C, 12.000 x g.
Inhale o serum superior em outro tubo centrífugo limpo pré-refrigerado para obter a proteína total.
Depois de quantificar o extrato de proteína acima, divide-o em um frigorífico de -80 ° C para conservar em reposição ou para uso direto em experimentos a jusante.
Extração total de proteína de amostra de tecido:
1. Preparação do líquido de extração:
Adicione 2 μl de mistura de inibidores de protease e 2 μl de mistura de inibidores de fosfatase a cada 500 μl de extração de proteína total fria, misturada no gelo de reposição posterior.
2. Tome 50-100 mg de amostra de tecido, lave-a com PBS e, em seguida, corte-a com uma faca o máximo possível, adicione 500 μl de extrato de proteína total e amortigue-a com um amortiguador de tecido / amortiguador até que não haja sólidos visíveis ao olho nu.
3. Inhale a homologação do tecido em um tubo centrífugo limpo pré-refrigerado e oscile por 10-20 minutos a 4 ° C.
Centrífuga durante 15 minutos em condições de 4 ° C, 10.000-14.000 × g.
Inhale o serum superior em outro tubo centrífugo limpo pré-refrigerado para obter a proteína total.
Depois de quantificar o extrato de proteína acima, divide-o em um frigorífico de -80 ° C para conservar em reposição ou para uso direto em experimentos a jusante.
Análise de perguntas frequentes
Concentração de proteína baixa?
Partes das amostras de tecido podem não ser fissadas durante o processamento, resultando em baixas concentrações de proteínas. É possível prolongar devidamente o tempo de tratamento do reagente A. Tratado em condições de oscilação contínua, sem oscilador também pode ser misturado com a cabeça de aspiração a intervalos de alguns minutos.
Velocidade de desintegração celular lenta?
Para garantir plenamente a atividade da proteína obtida pela extração, o líquido de extração usa a fórmula da proteína protetora, a capacidade de fissura é moderada e uma ampla gama de aplicações a jusante. prolongar adequadamente o tempo de fissura.
Como quantificar a proteína?
Recomenda-se a utilização do método BCA. O método de Bradford não é adequado porque o reagente A contém componentes que interferem com o método de Bradford, resultando em quantificações imprecisas. Se a diálise foi realizada ou o sistema de tampão foi substituído por uma coluna de desalinização, a quantificação pode ser feita com o método de Bradford.
4. Aparece precipitação gelatinosa durante a extração?
Às vezes, uma pequena quantidade de gel transparente aparece no produto de tratamento de extrato de proteína, o que é normal. Este gel transparente é um complexo que contém DNA genômico, etc. Sem detectar proteínas específicas que se ligam particularmente estreitamente ao DNA genômico, o soro pode ser extraído por centrifugação direta para experimentos posteriores; Se for necessário detectar e ligar o genoma a proteínas particularmente fortes, pode ser ultra-som por um intervalo de 10 segundos de 300w / 10 segundos, ultra-som por 3 minutos e, em seguida, extração de limpeza por centrifugação para experimentos de seguimento. A detecção de alguns fatores de transcrição comuns, como NF-kappaB, p53, etc., não requer ultrassom.
As proteínas extraídas são ativas?
Este kit não contém componentes de descalcificante iônico, não perturba a estrutura da proteína, não perturba a interação original entre as proteínas, e as proteínas mantêm sua composição natural e atividade.
Partes das amostras de tecido podem não ser fissadas durante o processamento, resultando em baixas concentrações de proteínas. É possível prolongar devidamente o tempo de tratamento do reagente A. Tratado em condições de oscilação contínua, sem oscilador também pode ser misturado com a cabeça de aspiração a intervalos de alguns minutos.
Velocidade de desintegração celular lenta?
Para garantir plenamente a atividade da proteína obtida pela extração, o líquido de extração usa a fórmula da proteína protetora, a capacidade de fissura é moderada e uma ampla gama de aplicações a jusante. prolongar adequadamente o tempo de fissura.
Como quantificar a proteína?
Recomenda-se a utilização do método BCA. O método de Bradford não é adequado porque o reagente A contém componentes que interferem com o método de Bradford, resultando em quantificações imprecisas. Se a diálise foi realizada ou o sistema de tampão foi substituído por uma coluna de desalinização, a quantificação pode ser feita com o método de Bradford.
4. Aparece precipitação gelatinosa durante a extração?
Às vezes, uma pequena quantidade de gel transparente aparece no produto de tratamento de extrato de proteína, o que é normal. Este gel transparente é um complexo que contém DNA genômico, etc. Sem detectar proteínas específicas que se ligam particularmente estreitamente ao DNA genômico, o soro pode ser extraído por centrifugação direta para experimentos posteriores; Se for necessário detectar e ligar o genoma a proteínas particularmente fortes, pode ser ultra-som por um intervalo de 10 segundos de 300w / 10 segundos, ultra-som por 3 minutos e, em seguida, extração de limpeza por centrifugação para experimentos de seguimento. A detecção de alguns fatores de transcrição comuns, como NF-kappaB, p53, etc., não requer ultrassom.
As proteínas extraídas são ativas?
Este kit não contém componentes de descalcificante iônico, não perturba a estrutura da proteína, não perturba a interação original entre as proteínas, e as proteínas mantêm sua composição natural e atividade.
