Kit de ELISA de citoquina de gordura humana (Chemerin)

Kit de ELISA de citoquina de gordura humana (Chemerin)

Requisitos de amostra
Tratamento da amostra: (1) amostra de água após a coleta de -20 ° C repetidamente congelado e derretido três vezes, depois de filtração de fibra de vidro
(2) amostras de tecido extraído com butanol: metanol: água (5: 25: 70 V: V: V), ou por fase
Os experimentos devem ser realizados o mais rápido possível após a extração. Se o teste não for realizado imediatamente,
As amostras podem ser mantidas a -20°C para serem verificadas.
As amostras que contêm NaN3 não podem ser detectadas porque o NaN3 inibe a atividade da peroxidase de raiz de moringa (HRP).

Kit de ELISA de citoquina de gordura humana (Chemerin)Passos de operação
1. amostragem: orificio padrão, orificio em branco (o orificio de controle em branco não inclui amostras e reagentes enzimáticos padrão, as operações restantes são as mesmas),
furos de amostra a serem medidos. Adicione 50 μl no orificio padrão na placa do pacote enzimático e adicione 40 μl de diluição da amostra no orificio da amostra a ser testada,
Em seguida, adicione 10 μl da amostra a ser testada (diluição final da amostra é de 5 vezes). Coloque a amostra no fundo da placa enzimática,
A quantidade não toca a parede do buraco, agite suavemente e misture.
2. Adição de enzimas: Adicione 50 μl de reagente enzimático por porão, exceto porão branco.
3. Crescimento a temperatura: Use a placa de vedação para a placa de vedação a 37 ° C durante 60 minutos.
4. Distribuição: diluir o líquido de lavagem concentrado 30 vezes com água destilada 30 vezes
5. lavagem: cuidadosamente remover a membrana de vedação, descartar o líquido, secar, encher cada buraco com líquido de lavagem, deixar em reposo 30 segundos depois de descartar, assim
Repita cinco vezes e arregue.
6. exibição de cor: adicionar primeiro o agente de cor A50μl para cada buraco, depois adicionar o agente de cor B50μl, misturar suavemente, exibição de cor a 37 ° C
15 minutos.
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Terminação: adicionar 50 μl de líquido de terminação por orifício para terminar a reação (neste momento, o azul vira amarelo).
Medição: medir a absorção fotográfica (OD) de cada orifício em sequência com um comprimento de onda de 450 nm em um orifício em branco. Determinação deve terminar
Realizar dentro de 15 minutos após o líquido.

Calculação
Leve a concentração do objeto padrão como coordenada horizontal, o valor do OD como coordenada longitudinal, desenhe a curva padrão no papel de coordenadas, de acordo com a amostra
O valor OD determina a concentração correspondente pela curva padrão; multiplicar por múltiplos de diluição; Ou com base na concentração e OD dos materiais padrão
Equação de regressão linear da quasicurva, substituir o valor OD da amostra pela equação, calcular a concentração da amostra e multiplicar pelo múltiplo de diluição,
concentração real da amostra.

Precauções
A caixa deve ser retirada do ambiente refrigerado após o equilíbrio de temperatura ambiente de 15 a 30 minutos antes de ser usada, se o pacote de marcação enzimática não for aberto após a placa.
Após o uso, a placa deve ser colocada em um saco selado.
O líquido de lavagem concentrado pode ser cristalizado, diluído pode ser aquecido no banho de água, e a lavagem não afeta o resultado.
Cada etapa de amostragem deve usar um amostrador e regularmente corrigir sua precisão para evitar erros de teste. Melhor tempo de uma vez.
Controle dentro de 5 minutos, se o número de espécimes é grande, recomenda-se o uso de uma pistola de remoção.
Por favor, faça a curva padrão ao mesmo tempo em cada medição, é melhor fazer um buraco composto. Se o teor de substância a ser testada na amostra for elevado demais (valor OD da amostra)
maior do que o valor OD do primeiro orifício padrão), dilua primeiro um certo múltiplo (n vezes) com o diluído da amostra
Por fim, multiplique o múltiplo de diluição total (×n×5).
A membrana de vedação é limitada a um uso único para evitar a poluição cruzada.
Por favor, guarde o substrato à luz.
De acordo estritamente com as instruções de operação, os resultados do ensaio devem ser determinados com base nas leituras enzimáticas. Todas as amostras, líquidos de lavagem e vários resíduos devem ser tratados como infecciosos.
Os diferentes componentes do lote deste reagente não devem ser misturados.

Especificações:

48 peças / caixa

Condições de conservação e prazo de validade
Conservação da caixa:; 2-8 ° C.
Duração: 6 meses