HEC-1-B Células de câncer endometrial humana

Nome do produto:HEC-1-B Células de câncer endometrial humana

Marca: Xangai Biologia
Número de células: 1x10^6 células
Vitalidade celular: 95% (Viabilidade por exclusão azul de Trypan)
Transmissão celular: 1: 4 a 1: 6; Troque o líquido 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%; Temperatura: 37°C
Teste celular: as células não contêm HIV-1, HBV, HCV, brancos, bactérias, leveduras e fungos
Condições de cultivo: DMEM (alto açúcar) + 10% FBS + 1% P / S; 37℃，5% CO2
Método de transmissão: recomendado 1: 2-1: 3 troca de líquido uma vez em dois dias
Condições de congelamento: sem líquido de congelamento de células séricas
Condições de congelamento: 90% FBS + 10% DMSO
Congelação celular: congelamento de nitrogênio líquido

Células ao pós-tratamento

As células são cultivadas em garrafas em bom estado depois de encher o líquido de cultura e fechar a boca da garrafa é um meio de transporte celular. Depois de receber as células de volta ao seu laboratório, primeiro abra a embalagem externa.75% de álcool pulverizado para desinfetar toda a garrafa e colocado em uma mesa ultra-limpa, operação estritamente estérilPosicionamento da caixa de cultivo2-4 horas. Observação sob o espelho: não exceder80% de convergência, pode ser engarrafado líquido de culturaRecolha no tubo centrífugo e junte6 ml de meio, colocar37 ° C, 5% CO2 incubadora cultura; Quando a convergência é superior a 80%, é transmitida ou congelada, dependendo das circunstâncias, para operações específicas, veja as etapas de cultura celular.（Observe que a entrega é selada garrafa de cultura, coloque no cultivo da caixa de cultura lembre-se de soltar a tampa da garrafa de cultura, após a geração recomenda uma garrafa com o meio de cultura dentro da garrafa original, outra garrafa com o meio de cultura próprio）

HEC-1-B Células de câncer endometrial humanaPassos de formação

Um,Recuperação de células: incluiráO tubo de congelamento de 1mL de suspensão celular é rapidamente agitado e descongelado em um banho de água de 37 ° C, adicionando 5mL de meio para misturar uniformemente. Centrifugar durante 5 minutos em 1000RPM, descartar o líquido superior e adicionarSopre bem após 4-6mL de meio de cultura. Em seguida, adicionar toda a suspensão celular em uma garrafa de cultura durante a noite (ou adicionar a suspensão celularEm um prato de 6 cmcultivo durante a noite. No dia seguinte, troce o líquido e verifique a densidade celular.

Dois.Transmissão celularSe a densidade celular80% a 90% podem ser cultivados.

a）、 Para as células adesivas, a transmissão pode ser feita através dos seguintes métodos:

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

Adicione 1-2ml de líquido digestivo (0,25% Trypsin-0,53mM EDTA) em uma garrafa de cultura, coloque-a em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir 1-2min, em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente recuperar a mesa de operação, toque alguns toques na garrafa de cultura depois de adicionarMais de 5mlcontém10% de soroO meio de cultura termina a digestão.

3. Sopre suavemente as células, aspirar após a queda, centrifugar em condições de 1000RPM por 8-10 minutos, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura depois de soprar bem.

Adicione a cultura em 5-6 ml / garrafa e divide a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 em um novo prato ou garrafa com 5-6 ml de cultura.

b）、 Para células suspensas, a transmissão pode ser feita com referência aos seguintes métodos:

Método 1: coletar as células, centrifugar em 1000RPM por 8-10 minutos, descartar o líquido, adicionar 1-2ml de líquido de cultura e soprar bem, dividir a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 a 1: 5 em um novo prato ou garrafa com meio de cultura de 8ml.

Método 2: pode escolher metade do método de troca de líquido, depois de descartar metade do meio de cultura, as células restantes são suspensas e a suspensão celular é dividida na proporção de 1: 2 a 1: 3 em um novo prato ou garrafa com meio de cultura de 8 ml.

P.S.:Se o cliente receber2ml pequenas células tubulares, depois de receber as células, pulverizar todo o tubo com 75% de álcool e depois de ser desinfetado em uma mesa ultra-neta ou um armário de segurança, operação estritamente estéril; Transferir as células tubulares para uma garrafa de cultura T25 ou6 cm prato de Petri, adicionar cerca de 5 ml de meio de cultura e misturar, colocar no recipiente de cultura durante a noite depois de verificar a densidade celular: se a densidade não for superior a 80%, a troca de líquido continuar a cultivar, a transmissão ou congelamento, conforme o caso. Se a densidade for superior a 80%, pode ser transmitida diretamente (método idêntico).

Três.Congelação celular:(Nota: o método de congelamento de células sem sangue, por favor, consulte nossa divisão)

1, as células crescem para cobrir a garrafa de culturaQuando 80% da área, descarte o líquido de cultura em uma garrafa de cultivo de 25 cm2 e limpe as células uma vez com PBS;

2, adicionar0,25% de líquido digestivo cerca de 1 ml para a garrafa de cultura, observado sob o microscópio invertido, até que as células retornem ao círculo para adicionar o líquido de cultura para terminar a digestão, suavemente soprar as células para que caiam, em seguida, transferir a suspensão para o tubo de centrifugação de 15 ml, 1000rpm centrifugação 5min;

Suspender as células com a quantidade adequada de líquido congelado e colocar em um tubo de congelamento;

Primeiro coloque o tubo de congelamento das células-20 ° C 1.5h, em seguida, movê-lo para -80 ° C

Algumas das células relacionadas são as seguintes: