Hepa1-6； Células de câncer de fígado de rato

Um, Hepa1-6； Células de câncer de fígado de ratoCondições de cultivo

Dois.Hepa1-6； Células de câncer de fígado de ratoTratamento após a recepção

Tratamento de células de recuperação:Encher o líquido de cultura e fechar a boca da garrafa após o cultivo em bom estado é a melhor maneira de transportar as células. receber as células75% de álcool pulverizado todoCélulasgarrafas，Estritamente estérilDepoisColoque as garrafas de células em uma caixa de cultura2-4 horas para estabilizar o estado celular。Depois da reposiçãoO microscópio observa o crescimento celular e fotografa as células em múltiplos diferentes (Melhor.40x, 100x, 200x cada um)，Fotos dos três primeiros diassimImportante pós-venda de base, não fornecer fotos padrão recebido em bom estado.

Tratamento de células congeladas:Depois de receber as células, observe se há gelo seco em caixa de espuma, se o tubo de congelamento está intacto ou não, se houver descongelamento, se encontrar vaporização de gelo seco ou descongelamento do tubo tem dano descongelado, por favor tire fotos e entre em contato conosco. Se a célula não entrar em contato conosco dentro de três dias da assinatura, o recebimento é considerado bom por padrão. Recuperação do primeiro tubo Se houver problemas de atividade, por favor, entre em contato conosco prontamente, o técnico comunicar-se com você para instruir depois de recuperar o segundo tubo,Não entrar em contato conosco para recuperar o segundo tubo não autorizado após o problema.

Passos de cultura celular

a eTransmissão celular：seNão excederQuando a convergência é de 80%, colete a cultura engarrafada em um tubo centrífugo, deixe 5 ml de meio de cultura e coloque-o em 37 ° C, 5% de CO₂incubação;Se a densidade celularSuper80% podem ser cultivados。

Células de paredeOs passos são os seguintes:

1) Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio;

2) Adicione 1 ml de líquido digestivo (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) na garrafa de cultura, coloque a caixa de cultura para digerir 1 min, em seguida, sob o microscópio para observar a digestão celular, se a maioria das células se arredondar e cair, rapidamente recuperar a mesa de operação, depois de bater alguns toques na garrafa de cultura, adicione 6 ml contendo soro de 10%.Meio de Culturaterminar a digestão;

3) Soprar suavemente as células, após a queda, aspirar para o tubo de centrifugação, 1000 rpm centrifugar 5-8min, descartar o líquido de limpeza superior, adicionar 1-2mL de meio de cultura depois de soprar bem;

4) A suspensão celular é dividida em uma proporção de 1: 2 em um novo prato de Petri de 6 cm contendo 5-6 mL de meio por garrafa, adicionando 5-6 mL de meio ou garrafa T25.

(ou seja,1 garrafa T25 para 2 garrafas T25 ou 2 pratos de Petri de 6 cm)

Células suspensasAs etapas de transmissão são as seguintes:

1- Método de semi-troca de líquido

Tratamento de semi-troca de líquido, colocando garrafas de cultivo em posição vertical na caixa de cultivoPor cerca de 1 hora, suavemente absorver cerca de 3 ml de meio de cultura, em seguida, o reabastecimento de 3 ml de meio de cultura, se o meio de cultura muda lentamente, pode adicionar diretamente cerca de 500 ul de FBS, a transmissão de 5 ml de meio de cultura pode ser reabastecida diretamente em duas garrafas de cultura, geralmente, a transmissão de 3 vezes ou mais pode ser transmitida por centrifugação uma vez, para remover as células mortas.

2. Método de troca de líquido centrífugo

A suspensão celular pode ser recolhida em um tubo centrífugo se necessário.1000rpm， Centrífuga 5min, descartar a limpeza superior, adicionar 1-2ml de líquido de cultura após a suspensão de mistura, depois de dividir a suspensão celular na proporção de 1: 2 em uma nova garrafa T25, adicionar 6-8ml de novo meio de cultura configurado de acordo com os requisitos das instruções para manter a vitalidade do crescimento das células, a transmissão subsequente é realizada de acordo com as circunstâncias reais na proporção de 1: 2 ~ 1: 5.

b eCongelação celular:

Quando as células crescem até cobrir 80% da área da garrafa de cultura, descarte o líquido de cultura na garrafa de cultura T25 e limpe as células uma vez com PBS;

2, adicionar 0,25% de líquido digestivo cerca de 1 ml para a garrafa de cultura, observar sob o microscópio invertido, até que as células retornem ao redor para adicionar 5 ml de líquido digestivo para terminar a digestão, em seguida, soprar suavemente as células para que caiam, em seguida, transferir a suspensão para o tubo de centrifugação de 15 ml, centrifugação de 1000 rpm em 5 minutos;

3, descartar o soro superior, as células precipitadas adicionar 1 ml de Yagi Bio-soro sem congelamento (Número da mercadoria:C7001）， Depois de misturar, adicionar ao tubo de congelamento.

Coloque as células congeladas diretamente-geladeira de 80 ° C, como posteriorQuerTransferir as células para um tanque de nitrogênio líquido.entãoPrecisa estar-80 ° C FrigoríficomeioArmazenamentoMais de 24 horasde novoTransferir para o tanque de nitrogênio líquido.

C eRecuperação celular:

1、Remoção do tubo de congelamento celular do nitrogênio líquido (AtençãoVestirProteçãoMáscara), coloque-a rapidamente. descongelar no banho de água de 37 ° C até que não haja cristalização no tubo de congelamento e, em seguida, limpar a parede externa do tubo de congelamento com 75% de álcool;

2、Mover as células do tubo de congelamento para o conteúdo 5ml de meio em tubo de centrífuga de 15ml, 1000rpm centrífuga 5min;

3、Eliminar, precipitar5 ml de meio de cultura em suspensão, vacinaçãoparagarrafas de cultivo T25,soltarem37 ℃, 5% CO₂culturas em caixas de cultura celular;

4、No dia seguinte, substituir o meio fresco para continuar a cultura.

Atenção:Algumas células estão mal ligadas e são propensas a perder células durante o transporte, o que é normal. Se a separação é maior, toda a cultura da garrafa pode ser coletada para o tubo centrífugo,1000rpm centrífuga 5min,Coleta de alta clarezaCultura de transição(cultivo comparativo posterior)Adicionando precipitação1-2ml， Sopre suavemente, ressuspender e digerir por 1-2 minutos, adicionando 5 ml de meio para terminar a reação. Centrifugar novamente, descartar a limpeza e adicionar 1-2ml de meio de cultura em suspensão. Em seguida, a transmissão por garrafa em proporção 1: 2 (dois T25), adicionando o novo meio de cultura para 5-8 ml / garrafa e, finalmente, colocando 37 ° C, 5% CO₂Cultura em uma caixa de cultura celular.