Gel de bromuro de hidrogênio

Para garantir o desempenho e a operação sem problemas do produto, leia cuidadosamente este manual antes de usar e, se tiver dúvidas, consulte o nosso suporte técnico pós-venda ou o pessoal de vendas local (veja o apêndice).

1. Introdução do produto

O CNBr Focurose 4FF é um meio de purificação de fluxo rápido que contém grupos cianato após a ativação do cianeto bromado, adequado para as moléculas biológicas que contêm proteínas acopladas, polipéptidos, ácidos nucleicos e outros aminoácidos. Após verificação repetida no processo de purificação biomédica, tem sido amplamente utilizado.

As características são as seguintes:

a) Aplicação ampla,Gel de bromuro de hidrogênioPode ser aplicado a macromoléculas biológicas ligadas a aminos.

b. acoplamento multiponto, simples, flexível, rápido, eficaz e eficiente para manter a atividade biológica e a estabilidade das biomoléculas.

c. Velocidade de fluxo rápida, alta produtividade e fácil de ampliar.

Tabela 1: Parâmetros de desempenho do meio

2. Condições de ligação

(A) Limpeza líquida

Tome a quantidade apropriada de cola sedimentada (cerca de 1,0 ml após a limpeza de 0,83 g), ressuspenda o meio com 5 vezes o volume de líquido A e seque a solução após 5 minutos. Repita este passo cinco vezes.

Nota: Esta etapa é usada para ativar o meio para garantir que o volume de limpeza do líquido A seja suficiente e o tempo de limpeza seja fixado em cerca de 0,5 h (o grupo acima do meio será hidrolizado por muito tempo).

b. Preparação da solução de base

As biomoléculas a serem acopladas são dissolvidas em líquido B ou substituídas em líquido B (concentração biomolécular de 1-10 mg/ml, recomendada 5 mg/ml).

NOTA: Certifique-se de que o pH e a concentração de sal são consistentes com o líquido B quando acoplado.

c) Conexão

O meio limpo e a amostra preparada são misturados em proporções iguais (proporção volumétrica), aquecidos e misturados a temperatura ambiente por 3-4 h. Após a determinação do sucesso da acoplamento (determinação da eficiência da acoplamento medindo o conteúdo biomolécular antes e depois da acoplamento), a solução é bombeada para secar.

NOTA: O acoplamento é recomendado para 3-4h a temperatura ambiente. Para distribuições instáveis, o acoplamento de 4-8 ° C é recomendado durante a noite.

(C) Limpeza

O meio acoplado é ressuspendido com 5 vezes o volume do líquido C e a solução é secada. Repita este passo três vezes.

NOTA: Esta etapa é usada para limpar os resíduos de biomoléculas no meio, que deve ser limpo *.

e) Fechado

Resuspender com 5 vezes o volume de líquido C, aquecer e misturar a temperatura ambiente por 3-4 horas e secar a solução.

Nota: Esta etapa é usada para fechar os grupos acima do meio, aquecer a temperatura ambiente e misturar por 3-4 horas.

f. Limpeza (D e E)

O meio fechado será ressuspendido com 5 vezes o volume do líquido D e a solução será secada após 5 minutos; O meio é ressuspendido com 5 vezes o volume de E e a solução é secada após 5 minutos. Repita este passo três vezes.

Nota: Esta etapa é usada para limpar as moléculas biológicas ácidas e alcalinas que não estão ligadas o suficiente.

g. Conservação

Resuspender o meio com 5 vezes o volume de água purificada e secar com 5 vezes o volume de 20% de etanol para ressuspender o meio e, finalmente, conservar com 20% de etanol.

Nota: Esta etapa é usada para preservar o meio e evitar o crescimento de micróbios.

h. Preparação de soluções

Liquido A: 0,001 MHCl, 0,5 M NaCl, ajustar o pH 3,0, conservação de 4-8 ° C (O líquido A deve ser pré-refrigerado antes do uso).

Liquido B: NaHCO3 0,2 M, NaCl 0,5 M, pH regulado 8,3 (se a biomolécula a ser acoplada é IgG, pH=8.5-9.0）， Conservação à temperatura ambiente.

Liquido C: 0,1 M Tris-HCl, pH regulado 8,3, conservado a temperatura ambiente.

Liquido D: 0,05 M Tris-HCl, 0,5 M NaCl, ajustar o pH 8,5, conservar a temperatura ambiente.

E líquido: O.05M GAN amina, 0.5MNaCl, ajustar o pH 3.5, conservar a temperatura ambiente.

Liquido F: 1.0M NaCl, conservado a temperatura ambiente.

3. Limpeza

Após a limpeza, algumas substâncias fortemente ligadas (por exemplo, algumas proteínas fortemente ligadas, proteínas degeneradas, lípidos, etc.) podem ser removidas para alcançar excelentes propriedades do meio de restauração (por exemplo, carga, fluidez, efeito de coluna, etc.).

A limpeza é recomendada após cada uso de 5 vezes, com a frequência de limpeza específica ajustada de acordo com a limpeza da amostra inicial purificada.

1 Limpeza regular

Lave com água purificada de 5 a 10 vezes o volume da coluna.

b. Lavar com líquido D de 5-10 vezes o volume da coluna.

c. Lavar com líquido E de 5-10 vezes o volume da coluna.

d. Enxague com um líquido F de 5-10 vezes o volume da coluna.

Enxague com água purificada de 5 a 10 vezes o volume da coluna.

f. Conservar após lavagem com 20% de etanol em 5-10 vezes o volume da coluna.

2 Limpeza intensa

a. Depois de lavar com 2-5 vezes o volume da coluna 0,2% de desinfetante não iónico, lavar imediatamente com água purificada de 5-10 vezes o volume da coluna.

b. Depois de lavar com 2-5 vezes o volume de coluna 6M de clorhidrato de guanida, lavar imediatamente com água purificada com 5-10 vezes o volume de coluna.

c. Conservar após lavagem com 20% de etanol em 5-10 vezes o volume da coluna.

NOTA: Se as condições de limpeza intensa são aplicáveis ​​depende principalmente da estabilidade das biomoléculas acopladas, é recomendado fazer um pré-experimento em pequena escala para verificar a estabilidade das biomoléculas antes de usar esta condição de limpeza.

4. Casos de aplicação

Caso 1

Caso 2

5. Perguntas frequentes

Tabela 2: Perguntas frequentes e soluções

6. Informações de encomenda

Tabela 3: Formulário de informações de encomenda

Nota: para comprar produtos de embalagem de grande dimensão ou outros produtos, consulte a nossa venda local ou suporte técnico pré-venda.