KMS-21BM_Células de mieloma múltiplo humano

KMS-21BM_Células de mieloma múltiplo humano

Informação do produto

Nome da célula：KMS-21BM_Células de mieloma múltiplo humano

Fonte da espécie: Pessoas

Sexo Idade: mulheres,67Idade

Fonte da organização: líquido torácico

Características de crescimento: Crescimento suspenso

Forma celular: Tipo linfocito

Especificações celulares: 1 X 10⁶células/T25 ou tubo de congelamento de 1 ml

Condições de cultivo:RPMI 1640 + soro bovino fetal de 10%，37 ℃, 5% de CO2

Condições de congelamento： 90% FBS + 10% DMSO

Método de transmissão: 1：3 Gerações，2-3 dias para 1 geração

Operações de cultura celular

Transporte de gelo seco：Imediatamente após a recepção das células, é necessário transferir para a conservação de nitrogênio líquido, ou-80°CCongelação de curto prazo ou recuperação direta

Transporte a temperatura normal：Depois de receber as células, retire a garrafa de cultura celular da caixa imediatamente e siga os passos de operação abaixo para a transmissão de cultura

Transmissão celular：Densidade celular de 80%-90% para a cultura de transmissão

Etapas de operação de células em garrafas de cultura

Para as células colhidas, antes do envio, enchemos toda a garrafa com o meio de cultura para reduzir a perda de células colhidas durante o transporte do produto.

1. Depois de receber as células, observe se há contaminação. Coloque a garrafa sob o microscópio invertido para verificar cuidadosamente se ela é turbia ou contaminada por bactérias. Como há choques durante o transporte, e algumas células também são sensíveis às mudanças de temperatura, pode haver situações em que algumas células flutuam, essas células ainda são células vivas, não descartem, podem ser usadas ​​por enriquecimento centrífugo.

2. Para as células adesivas, em um ambiente de gabinete de biossegurança, remova o meio de cultura excessivo da garrafa com uma bomba de vácuo para cerca de 5-8 mL restantes e selecione o conteúdo adequado de CO2 de acordo com o meio de cultura 37℃Cultivar em uma caixa termostática e soltar a tampa da garrafa. Se as células estiverem cheias de garrafas de cultura, transmita imediatamente.

3. Para as células em suspensão, em um ambiente de gabinete de bioseguridade, transferir as células da garrafa para a centrifugação, centrifugar 150 g durante 5 minutos, depois de remover a limpeza, espalhar as células com meio de 5 ml, transferir para uma nova garrafa e, em seguida, colocar no teor adequado de CO2 37℃Cultivo em uma caixa termostática.

Etapas de operação de células tubulares congeladas

Nota: Para garantir a alta vitalidade das células, descongelar a cultura imediatamente após o recebimento do produto.

1. Coloque o tubo de congelamento em 37℃O banho de água oscila para trás e descongela rapidamente. Para evitar a poluição, certifique-se de que o tubo de congelamento está colocado acima da superfície da água. O descongelamento é rápido, cerca de 1 minuto.

2. Depois de derreter o líquido no tubo de congelamento, remova-o imediatamente e pulverize a superfície do tubo de congelamento com álcool. A partir desta etapa, as operações subsequentes devem ser realizadas no armário de biossegurança.

3. Transferir o líquido do tubo de congelamento para um tubo centrífugo contendo 5 ml de meio completo, centrifugar 150 g durante 5 minutos e remover o líquido superior com uma bomba de vácuo.

4. Suspender as células e transferir para uma nova garrafa com o meio acabado. Para garantir a taxa de sobrevivência da recuperação celular, coloque o meio em 37℃Use após o aquecimento do banho.

5. Colocar as células em 37 contendo o CO2 adequado℃Cultivo em uma caixa termostática.

Cultura de transmissão celular adesiva

1. Absorber e descartar o meio da garrafa, adicionando PBSLave uma vez.

2. Junte-se 1mL 0,25 (p/v) Tripsina-EDTASolução e colocar em 37Incubar em uma caixa de cultivo ℃ até que as células sejam separadas da parede. Este processo requer cerca de 3-5Um minuto.

3. Junte-se 2em mLO meio completo neutraliza a pancreatase e sopra suavemente para soprar as células da superfície da garrafa de cultura e permitir que as células se dispersem.

4. Recolha a suspensão celular15 mlno tubo centrífugo,150 g Centrífuga 5 minutosRemova a limpeza com uma bomba de vácuo. Tome a quantidade apropriada de meio para ressuspender as células e transferir para uma nova garrafa para a cultura.

A transmissão de células suspensas pode ser feita com referência aos seguintes métodos:

I. Transmissão direta

1. Até que as células em suspensão cresçam até 80% ~ 90% (a suspensão celular se amarela), pode ser transmitida;

2. usarSucçãoAbsorber a suspensão celular 1 / 2 ~ 1 / 3;

3. Adicione a quantidade apropriada de meio fresco e continue a cultivar.

   Método de transmissão centrífuga (em caso de descoberta de fragmentos celulares)

4. Transferir a suspensão celular paraTubo centrífugodentro;

5. 150 g de centrifugação por 5 min, eliminando o líquido da camada superior;

6. Suspender células usando meios frescos;

7. A suína absorve a quantidade adequada de suspensão celular e carrega a novaCultivar garrafasAdicione a quantidade apropriada de meio fresco e continue a cultivar.

Operação de congelamento celular

1. 1.000 rpm centrífuga 5 minutos para remover a clara superior. Adicione 1 ml de soro para ressuspender as células, adicione soro e DMSO de acordo com o número de células e misture suavemente，Concentração final de DMSO de 10%, densidade celular não inferior a 1 x 10⁶/mL， Cada tubo de congelamento congela 1mL de suspensão celular, note que o tubo de congelamento é bem marcado；

2. Coloque o tubo de congelamento na caixa de refrigeração do programa, coloque-o em um frigorífico de -80 ° C e transfira-o para o armazenamento de nitrogênio líquido após pelo menos 2 horas.

Algumas das células relacionadas são as seguintes:

Consulte-nos para mais células:Mesotelioma de câncer (pulmonar primário) NCI-H226