Kit qPCR com sonda de algodão mexicano (sem ginseng)

Kit qPCR com sonda de algodão mexicano (sem ginseng)

Kit de PCR em tempo real da sonda Anthonomus grandis Boheman (sem controle interno)

Kit qPCR com sonda de algodão mexicano (sem ginseng)Produtos e características:
Tecnologia de PCR quantitativa por fluorescência em tempo real baseada na sondagem TaqMan. Projeto de precursores específicos e sondas fluorescentes TaqMan para sequências genéticas específicas do campaneiro de algodão mexicano. No sistema de reação de PCR, se houver um ácido nucleico do elefante de algodão mexicano, o precursor se liga especificamente à região correspondente desse ácido nucleico e amplifica o gene sob a ação da polimerase de DNA Taq. Ao mesmo tempo, a sonda fluorescente é hibridada específicamente com a sequência de DNA alvo amplificada e a enzima Taq corta a sonda fluorescente durante a extensão, separando o grupo fluorescente do grupo de extinção, liberando sinais fluorescentes. Detecção da campanha de algodão mexicano em amostras por meio do monitoramento em tempo real das mudanças no sinal fluorescente.Tem as seguintes características:

Quando aberto, o usuário só precisa fornecer um modelo de DNA de amostra.

Os primeiros e as sondas são otimizados para alta sensibilidade analítica e podem atingir 100 cópias/reações.

Fornecer controle positivo para facilitar a distinção de amostras falsas negativas.

Alta especificidade, os primeiros são projetados com base em áreas altamente conservadas do DNA do algodão mexicano e não interagem com outros DNA.

Pode ser usado tanto para teste qualitativo quanto para teste quantitativo. Para quantificação, seu intervalo linear não é inferior a 5 séries de quantidade.

Este produto é suficiente para 50 reações de PCR por fluorescência quantitativa por sonda de sistema de 20 μL.

Este produto só pode ser usado para pesquisa científica.

Especificações e ingredientes:

Transporte e armazenamento:Transporte a baixa temperatura, conservação de -20 ° C, período de conservação de 12 meses.
Reagentes próprios amostras de DNA.

Kit qPCR com sonda de algodão mexicano (sem ginseng)Uso:
I. Dilução de amostras de curva padrão(Tome por exemplo as 6 diluições de 10 vezes 10E1-10E6 cópias/μL). Devido às altas concentrações do produto padrão, as seguintes diluições devem ser realizadas em áreas separadas e nunca contaminar a amostra ou outros componentes deste kit). Para aumentar a estabilidade do produto e evitar a propagação de patógenos infecciosos, este produto não fornece amostras vivas como controle positivo, apenas fragmentos de DNA não infeccioso como controle positivo.

Marce 6 tubos centrífugos, 6, 5, 4, 3, 2 e 1, respectivamente.

2. Adicione 45 μL de diluição de modelo PCR fluorescente com a cabeça de pistola de núcleo, preferivelmente com a cabeça de pistola de núcleo, abaixo).

3. Adicione 5 μL de 1 x 10E7 cópia/μL de controle positivo (kit fornecido) no tubo 6 e agite completamente durante 1 minuto para obter uma amostra de curva padrão de 1 x 10E6 cópia/μL. Coloque no gelo.

4. Alterar a cabeça, adicionar 5 μL de 1 x 10E6 cópia/μL de controle positivo (diluído anteriormente) no tubo 5, agitar completamente durante 1 minuto para obter 1 x 10E5 cópia/μL de amostra de curva padrão. Coloque no gelo.

5. Alterar a cabeça, adicionar 5 μL de 1 x 10E5 cópia/μL de controle positivo (diluído anteriormente) no tubo 4, agitar completamente durante 1 minuto para obter uma amostra de curva padrão de 1 x 10E4 cópia/μL. Coloque no gelo.

Repita a operação acima até obter uma amostra de curva padrão de 6 diluições. Coloque no gelo.

Preparação de amostras de DNA

Se houver N amostras, é melhor definir N + 2 extrações, uma das quais é PC (preparação de amostra para controle positivo) e uma é NC (preparação de amostra para controle negativo). 10 μL de diluição número 4 obtida na etapa anterior, juntamente com uma certa quantidade de água, podem ser usados para tornar o volume total o mesmo que o volume inicial requerido para cada preparação.

PC. Use também água como NC.

Purificar o DNA de amostras com métodos de escolha, este kit é compatível com a maioria dos kits de extração de DNA de amostras no mercado. Também é possível comprar liberadores de ácidos nucleicos livres de extração da nossa empresa.

Reação qPCR de sonda (sistema de 20 μL, realizada na sala de preparação da amostra)

Se for feita uma análise quantitativa e apenas uma repetição, marcar N + 9 tubos de PCR, dos quais N + 2.

N + 2 amostras obtidas anteriormente, 1 para controle negativo por PCR (com água como modelo) e 6 para curvas padrão. Se a análise qualitativa for feita e apenas uma repetição for feita, marcar N + 4 tubos de PCR, dos quais N + 2 para N + 2 amostras obtidas anteriormente, 1 para controle negativo de PCR (com água como modelo) e 1 para controle positivo de PCR (diretamente com diluição de controle positivo do tubo 4 da etapa 6 como modelo). As etapas operacionais são descritas abaixo apenas como um exemplo de análise quantitativa.

10. Pressione a tabela abaixo para adicionar os componentes no tubo de marcação(Esta tabela lista apenas uma repetição. O controle positivo é definido após a configuração do tubo de amostra e do controle negativo, e as amostras de controle positivo devem ser adicionadas até que todas as tampas do tubo sejam armazenadas):

11. Depois de cobrir a tampa, faça a PCR de acordo com os seguintes parâmetros:

IV. Tratamento de dados

Se este kit for usado para testes quantitativos, a curva padrão será desenhada com o valor log da concentração de controle positivo como eixo horizontal e o valor Ct como eixo vertical. Em seguida, o valor log da concentração de DNA da amostra é calculado a partir da curva padrão para o valor Ct da amostra.

Se esta caixa for usada para testes qualitativos e somente for considerada positiva ou negativa, a Ct do controle negativo não deve ter nenhum valor numérico ou o valor de Ct deve ser igual ou superior a 40. Os controles positivos devem ter um aumento logarístico de fluorescência, com uma curva típica de amplificação e valores de Ct devem ser menores de 40. As amostras tratadas são positivas se a Ct for inferior a 40. Se nenhum valor de Ct for maior ou igual a 40, é negativo.
Só para pesquisa científica, não para diagnóstico clínico! Todos os produtos são exclusivamente para uso científico e não devem ser usados ​​para qualquer outro propósito, como o tratamento de pessoas ou animais, nem fornecer produtos ou serviços para qualquer indivíduo. Dependendo das instruções do produto de recepção real, as instruções do site são apenas para referência.