NCI-H2009 Identificação de células de câncer de gangliona pulmonar humana/STR

NCI-H2009 Identificação de células de câncer de gangliona pulmonar humana/STR

Introdução das células

A linhagem NCI-H2009 [H2009], criada em agosto de 1988, é uma linhagem celular que apresenta morfologia epitelial, isolada dos pulmões de uma mulher branca de 68 anos com câncer de próstata 4. Os pacientes foram previamente tratados com liao e 放she. O paciente era um fumante de trinta pacotes por ano.

Propriedades celulares

1) Fonte: Mulher branca de 68 anos Pulmões

2) Morfologia: como células epiteliais, crescimento de parede

3) Conteúdo: > 1x106 número de células

4) Especificações: garrafa T25 ou embalagem de tubo de congelamento de 1ml

5) Uso: somente para uso científico.

Transporte e conservação

Transporte de gelo seco e recuperação de células sobreviventes

(1) 1mL embalagem do tubo de congelamento para o transporte de gelo seco, após o recebimento do frigorífico de -80 graus de conservação durante a noite para transferir para o nitrogênio líquido ou recuperação direta, se o gelo seco for descoberto volátil e limpo, a tampa da garrafa do tubo de congelamento caiu, quebrou e as células estão contaminadas, entre em contato conosco imediatamente.

(2) Envio a temperatura normal das células sobreviventes de recuperação da garrafa T25 e operação após recepção de acordo com o método de tratamento após recepção das células.

Tratamento após a recepção das células

1) Depois de receber as células, a parede da garrafa de desinfecção de 75% de álcool coloca a garrafa T25 em uma caixa de cultivo de 37 ° C para colocar cerca de 2-3 h, se a garrafa de cultivo for descoberta danificada, derramamento líquido e poluição celular, por favor, entre em contato conosco após tirar uma foto.

2) Por favor, confirme o estado da célula sob o microscópio 4 ou 5X, ao mesmo tempo tirar 2-3 fotos das células recém-recebidas (10 x, 20 x) e uma foto da aparência da garrafa de cultura, como base para o estado da célula no momento da recepção após a venda.

3) Células adhesivas: as células são colocadas em uma caixa de cultivo de 37 ° C por 2-3h, observando o crescimento das células e a situação de adesão sob o microscópio, algumas células adhesivas podem cair devido à vibração e se agrupar após a queda durante o transporte rápido. Se a densidade de crescimento das células observadas sob o espelho for inferior a 60%, o meio de irrigação pode ser removido da garrafa (se as células não pegadas precisarem de reciclagem centrífuga, ressuspender na garrafa original), adicionar o novo meio de cultura completo de 6-8 mL e colocar na caixa de cultura celular para continuar a cultura. Se a densidade de crescimento celular for superior a 70% a 80%, a transferência celular pode ser realizada. Durante a transmissão, as células que caíram devido à vibração de transporte precisam ser recuperadas por centrifugação.

4) Nota: o meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua o meio de cultura completa recém-formulada de acordo com as condições de cultura celular do manual de instruções para cultivar células. Uma transmissão após a recepção das células sugere a transmissão de garrafas de cultura T25 1: 2.

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Preparação de meios de cultivo e condições de congelamento

1) Preparar o meio de base DMEM/F12 (iCell-0005) 92%

Soro fetal bovino de alta qualidade (iCell-0500) 5%

GlutaMAX-1 Glutamina (iCell-0900) 1%

P/S melanomicina-meicina de cadeia (iCell-15140-122) 1%

ITS (insulina + transferína + selênio) (iCell-4507) 1%

Song hidrogenável (iCell-8450) 10nM

Beta-Estradiol (iCell-8140) 10 nM

2) Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 graus Celsius, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.

3) Liquido congelado: 90% soro, 10% DMSO, atualmente disponível.

Tratamento celular:

1) Recuperação de células congeladas:

O tubo de congelamento que contém 1mL de suspensão celular é agitado rapidamente para descongelar em banho de água a 37 ° C e adicionado a um tubo centrífugo que contém 4-6mL de meio de cultura de quantum completo para misturar uniformemente. Centrifuge 3-5min em condições de 1000RPM, descarte o líquido superior, completando o meio de cultura para ressuspender as células. Em seguida, a suspensão celular é adicionada a uma garrafa de cultura (ou prato) contendo 6-8ml de meio de cultura quantum terminado para uma cultura de 37 ° C durante a noite. No dia seguinte, o crescimento celular e a densidade celular foram observados sob o microscópio.

2) Transferência celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

Para a transmissão de células de parede adherente pode fazer referência aos seguintes métodos

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

Adicionar 0,25% (w / v) pancreatina mei-0,53 mM EDTA em uma garrafa de cultura (garrafa T25 1-2mL, garrafa T75 2-3mL), colocar em uma caixa de cultura de 37 ° C para ser digerida até que a camada celular se disperse (geralmente dentro de 5 a 15 minutos) para que o meio de cultura alcance o pH normal (7,0 a 7,6), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, para evitar a coagulação, não bater ou agitar a garrafa para agitar as células enquanto espera a separação celular. As células difíceis de separar podem ser colocadas a 37 ° C para facilitar a dispersão. Se a maioria das células se arredondar e cair, rapidamente recuperar a mesa de operação e bater alguns toques na garrafa e adicionar 3-4 ml de meio contendo 10% FBS para terminar a digestão.

3. suavemente derrotado e aspirado, centrifugar 3-5min em 1000RPM, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e soprar bem. Divida a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 em uma nova garrafa T25, adicione 6-8ml de novo meio WAN completo configurado de acordo com as instruções para manter a vitalidade do crescimento das células, e a transmissão subsequente é realizada em uma proporção de 1: 2 ~ 1: 5 de acordo com as circunstâncias reais.

3) Congelação celular: após a recepção das células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares nas primeiras 3 gerações para uso experimental posterior.

A garrafa T25 abaixo é um exemplo;

Quando as células são congeladas, de acordo com o processo de transmissão celular, as células digeridas são coletadas em um tubo centrífugo, e a contagem da placa de contagem de células sanguíneas pode ser usada para determinar a densidade de congelamento das células. A densidade de congelamento recomendada para células gerais é de 1 x 10 ^ 6 ~ 1 x 107 células vivas / ml.

2. 1000rpm centrífuga 3-5min, remover a clara superior. Suspender as células com o congelador celular preparado, por cada 1 ml de congelador contém 1 x 10 ^ 6 ~ 1 x 107 células vivas / ml atribuído a um tubo de congelamento para distribuir as células para o tubo de congelamento, marcar o nome, álgebra, data e outras informações.

Coloque as células a congelar em uma caixa de refrigeração do programa durante a noite em um frigorífico de -80 graus e, em seguida, coloque-as em um recipiente de nitrogênio líquido para armazenar. Registre também a localização do tubo de congelamento no recipiente de nitrogênio líquido para consulta e uso posterior.