NCI-H522 (células humanas de câncer de pulmão de células não pequenas)

NCI-H522 (células humanas de câncer de pulmão de células não pequenas)

Marca: Xangai Biologia
Número de células: 1x10^6 células
Vitalidade celular: 95% (Viabilidade por exclusão azul de Trypan)
Nome da célula:NCI-H522 (células humanas de câncer de pulmão de células não pequenas)

Fonte: Humano
Idade: Homem, 58 anos
Fonte da organização: pulmões
Características de crescimento: Crescimento de parede
Morfologia celular: epitelial
Especificações celulares: 1 x 106 células/T25 ou tubo de congelamento de 1 ml
Condições de cultivo: RPMI-1640 + 10% soro bovino fetal (FBS)
37 ℃, 5% de CO2
Condições de congelamento: 90% FBS + 10% DMSO
Método de transmissão: 1: 3 a 1: 6 gerações, 1-2 dias para 1 geração

Operações de cultura celular
Transporte de gelo seco: transferência imediata para nitrogênio líquido para conservação após recepção das células, congelação de curto prazo em frigorífico a -80 ° C ou recuperação direta
Transporte a temperatura normal: após receber as células, retire imediatamente a garrafa de cultura celular da caixa e siga os passos de operação abaixo para a transmissão de cultura
Transmissão celular: densidade celular de 80% - 90%, a cultura de transmissão pode ser realizada
Etapas de operação de células em garrafas de cultura
Para as células colhidas, antes do envio, enchemos toda a garrafa com o meio de cultura para reduzir a perda de células colhidas durante o transporte do produto.
Depois de receber as células, observe se há contaminação. Coloque a garrafa sob o microscópio invertido para verificar cuidadosamente se ela é turbia ou contaminada por bactérias. Como há choques durante o transporte, e algumas células também são sensíveis às mudanças de temperatura, pode haver situações em que algumas células flutuam, essas células ainda são células vivas, não descartem, podem ser usadas ​​por enriquecimento centrífugo.
Para as células de parede, no ambiente do gabinete de biossegurança, remova o meio de cultura excessivo da garrafa com uma bomba de vácuo, até cerca de 5-8 mL restantes, e selecione o conteúdo de CO2 apropriado do meio de cultura em uma caixa de cultivo termostática de 37 ° C, solte a tampa da garrafa. Se as células estiverem cheias de garrafas de cultura, transmita imediatamente.
Para as células em suspensão, no ambiente de gabinete de bioseguridade, transferir as células da garrafa para a centrifugação, centrifugar 150 g por 5 minutos, depois de remover a limpeza superior, espalhar as células com meio de 5 ml, transferir para uma nova garrafa e, em seguida, colocar a cultura em uma caixa termostática de 37 ° C com o conteúdo apropriado de CO2.
Etapas de operação de células tubulares congeladas
Nota: Para garantir a alta vitalidade das células, descongelar a cultura imediatamente após o recebimento do produto.
Coloque o tubo de congelamento em banho de água de 37 ° C para agitar e descongelar rapidamente. Para evitar a poluição, certifique-se de que o tubo de congelamento está colocado acima da superfície da água. O descongelamento é rápido, cerca de 1 minuto.
Uma vez que o líquido derrete no tubo de congelamento, remova-o imediatamente e use álcool para pulverizar a superfície do tubo de congelamento. A partir desta etapa, as operações subsequentes devem ser realizadas no armário de biossegurança.
3. Transferir o líquido do tubo de congelamento para um tubo centrífugo contendo 5 ml de meio completo, centrifugar 150 g durante 5 minutos e remover o líquido superior com uma bomba de vácuo.
4. Suspender as células e transferir para uma nova garrafa com o meio de cultura terminado. Para garantir a taxa de sobrevivência da recuperação celular, use o meio de cultura após o pré-aquecimento de banho de água a 37 ℃.
Coloque as células em uma caixa termostática de 37 ° C contendo o CO2 adequado para a cultura.
Cultura de transmissão celular adesiva
1. Absorber e descartar o meio da garrafa, adicionar PBS para lavar uma vez.
Adicione 1 mL de 0,25 (w / v) solução de Trypsin-EDTA e coloque-a em uma incubação de 37 ° C até que as células sejam separadas da parede. Este processo leva cerca de 3-5 minutos.
3. Adicione 2mL de meio completo e pancreatase, e suavemente soprar para soprar as células da superfície da garrafa de cultura e permitir que as células se dispersem.
Recolha a suspensão celular em um tubo de centrifugação de 15 ml, centrifuge 150 g durante 5 minutos e retire o líquido superior com uma bomba de vácuo. Tome a quantidade apropriada de meio para ressuspender as células e transferir para uma nova garrafa para a cultura.
A transmissão de células suspensas pode ser feita com referência aos seguintes métodos:
I. Transmissão direta
Até que as células em suspensão cresçam até 80% ~ 90% (a suspensão celular se amarela), pode ser transmitida;
1 / 2 ~ 1 / 3 da suspensão celular com uma aspiradora;
Adicione a quantidade apropriada de meio fresco e continue a cultivar.
Método de transmissão centrífuga (em caso de descoberta de fragmentos celulares)
1. transferir a suspensão celular para o tubo centrífugo;
2,150 g de centrifugação por 5 min, eliminando o líquido da camada superior;
3. Uso de meios de cultura frescos para ressuspender células;
A suína absorve a quantidade apropriada de suspensão celular, carrega uma nova garrafa de cultura e adiciona a quantidade apropriada de meio fresco para continuar a cultura.
Operação de congelamento celular
1.1000rpm centrífuga para remover a clara superior por 5 minutos. Adicionar 1 mL de soro de células resuspendidas, de acordo com o número de células adicionar soro e DMSO, misturar suavemente, a concentração final de DMSO é de 10%, a densidade celular não é inferior a 1 x 106 / mL, cada tubo de congelamento congelar 1 mL de suspensão celular, observar a identificação do tubo de congelamento;
Coloque o tubo de congelamento na caixa de refrigeração do programa, coloque-o em um frigorífico de -80 ° C e transfira-o para o armazenamento de nitrogênio líquido após pelo menos 2 horas.

Algumas das células relacionadas são as seguintes: